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地高辛标记Ucp2 基因RNA探针的制备和应用

提交时间: 2018-07-11
作者: 刘志贞 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室 太原 030001 ; 张凯丽 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室 太原 030001 ; 孙雨晴 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室 太原 030001 ; 赵虹 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室 太原 030001 ; 郝宇卉 忻州职业技术学院医学系基础医学教研室 忻州 034000 ; 李美宁 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室 太原 030001 ;
作者单位: 1.山西医科大学生物化学与分子生物学教研室, 太原 030001; 2.忻州职业技术学院医学系基础医学教研室, 忻州 034000;

内容摘要

目的:为了制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT -PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM -T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果:成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论:成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA 原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。
点击下载全文 评论 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量:1528 下载量:193
推荐引用方式: 刘志贞,张凯丽,孙雨晴,赵虹,郝宇卉,李美宁.地高辛标记Ucp2 基因RNA探针的制备和应用.[J].中国生物工程杂志 (点此复制)
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[V1] 2018-07-11 10:53:54 chinaXiv:201807.00039V1 下载全文
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