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1. chinaXiv:201811.00045 [pdf]

恩诺沙星分子印迹电化学传感器的制备及其 在食品快速检测中的应用

秦思楠; 唐录华; 高文惠
分类: 生物学 >> 生物工程

以恩诺沙星(ENRO)为模板分子,邻苯二胺(OPD)和邻氨基苯酚(OAP)为复合功能单体,在NaAc-HAc缓冲液中,采用电聚合法在玻碳电极表面制备了能够特异识别模板分子及其结构类似物的分子印迹电化学传感器。试验选用含1mol/L氯化钾及1mmol/L铁氰化钾的混合液作为表征溶液,采用循环伏安法和方波伏安法研究了传感器的电化学响应特性,并优化制备和检测条件。结果表明,在最佳条件下,恩诺沙星在2×10-6mol/L~4×10-5mol/L浓度范围内线性关系良好,检出限为7.0×10-7mol/L,该传感器具有良好的稳定性和重现性,对恩诺沙星以及结构类似物具有良好的选择性。采用该传感器对实际样品牛奶、鸡肉、猪肉和鸡蛋中的恩诺沙星进行检测,加标回收率在83.2%~92.7%之间,相对标准偏差(RSD)在1.0%~4.8%之间(n=5),该传感器选择性强、稳定性好、操作简便、检测快速灵敏、成本低、具有良好的应用前景。

提交时间: 2018-11-08 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量17下载量11 评论 0

2. chinaXiv:201811.00051 [pdf]

重组Humicola insolens角质酶的高密度发酵优化

黄燕; 孙益荣; 吴敬; 宿玲恰
分类: 生物学 >> 生物工程

在采用前期已构建的重组菌E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显。同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性,考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂酰乙醇胺活性为9.8 U·mg-1(NPB水解比活力为1047.6 U·mg-1),在卵黄平板出现了明显的反应圈现象。在此基础上,本研究又尝试了高菌体浓度结合高诱导强度的发酵策略,以进一步提高重组酶在3-L罐中的表达水平。优化后的最佳条件及结果为:OD600为75时,恒速流加0.8 g·L ·h-1的乳糖溶液,发酵24 h后,酶活达到最大值4788.0 U·mL-1,约为摇瓶发酵酶活的28倍,与OD600为50时、流加0.2 g·L-1·h-1进行诱导的发酵策略(酶活2233.0 U·mL-1)相比,提高幅度约为114.0%,发酵时间缩短40.0%。

提交时间: 2018-11-08 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量18下载量11 评论 0

3. chinaXiv:201811.00050 [pdf]

干扰素在肝癌细胞Huh7.0中诱导SAMHD1 抑制HBV复制

乔淼; 胡杰; 毛彬力; 皮思蝶; 胡源
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:研究干扰素调节宿主限制性因子SAMHD1的表达而抑制HBV复制的分子机制。方法:首先不同剂量的干扰素α、β和γ处理Huh7.0细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测SAMHD1在转录和翻译后的表达水平;进一步通过siRNA干扰内源性的SAMHD1,再评价干扰素α、β对病毒的抑制效应;最后通过免疫荧光检测了干扰素α诱导内源性SAMHD1 的细胞定位及Southern blot检测了SAMHD1细胞定位对病毒复制的影响。结果:在Huh7.0细胞中,SAMHD1的RNA水平和蛋白表达明显受干扰素α和β的诱导升高;干扰SAMHD1后干扰素α和β对HBV复制的抑制作用消失;SAMHD1定位在细胞核内,干扰素α诱导SAMHD1同样定位在细胞核内,缺失核定位信号后SAMHD1丧失了其抑制病毒复制的作用。结论:在Huh7细胞中,干扰素α、β能诱导 SAMHD1表达上调来抑制HBV的复制,SAMDH1的抗病毒作用依赖于其细胞定位。

提交时间: 2018-11-08 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量14下载量10 评论 0

4. chinaXiv:201811.00046 [pdf]

哺乳动物细胞灌流培养工艺研究进展

苏爽; 金永杰; 黄瑞晶; 李剑; 徐寒梅
分类: 生物学 >> 生物工程

当前生物制药领域,由于成本压力、市场需求急剧波动以及生物仿制药的竞争日益激烈,现有的生物制造技术受到诸多挑战,生物技术公司越来越倾向于开发灵活、高效的创新型生产制造工艺。灌流培养作为当前哺乳动物细胞培养的重要工艺之一,不仅可以通过不断移出副产物和添加营养物来提供有利于细胞的稳定环境,以解决蛋白质量不稳定或者表达量偏低等问题,还可以通过提高单位体积产率来优化产能利用率并提高生产效率。本文就灌流培养用于哺乳动物细胞培养的研究进展做了系统介绍,并为其进一步开发与应用提供参考。

提交时间: 2018-11-08 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量14下载量10 评论 0

5. chinaXiv:201811.00049 [pdf]

美洲大蠊内生菌几丁质酶基因的克隆、表达及其活性研究

许敏华; 张晶晶; 金小宝; 李小波; 王艳; 马艳
分类: 生物学 >> 生物工程

摘要【目的】对美洲大蠊内生粘质沙雷氏菌几丁质酶ChiA基因进行克隆、可溶性表达及功能验证。【方法】PCR扩增ChiA基因,TA亚克隆,构建重组表达载体ChiA/pET21b,生物信息学分析和低温诱导表达、SDS-PAGE、Western-Blot鉴定,打孔法对几丁质酶活性检测。【结果】PCR成功扩增了ChiA基因序列,该序列与Gen Bank上的S.marcescens ChiA基因序列同源性达99%;该序列编码571个氨基酸,并能够在原核系统中稳定表达。可溶性表达分析显示:通过低温诱导表达,获得可溶性的目的蛋白;活性试验发现:含目的蛋白的表达产物可分解几丁质,且活性强于美洲大蠊内生粘质沙雷氏菌。【结论】从美洲大蠊内生粘质沙雷氏菌基因组中成功克隆了几丁质酶ChiA基因,通过原核表达系统获得了具有较强活性的可溶性几丁质酶ChiA,为其应用奠定了基础。

提交时间: 2018-11-08 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量13下载量10 评论 0

6. chinaXiv:201811.00048 [pdf]

利用CRISPR/Cas9技术构建流感病毒高产细胞系MDCK-Tpl2-/-

刘赛宝; 李亚芳; 王辉; 王伟; 冉多良; 陈洪岩; 孟庆文
分类: 生物学 >> 生物工程

Tpl2是调节I型(IFNα/β)和II型(IFNγ)IFN的关键调控因子,对病毒感染期间产生有效免疫应答至关重要。为了建立支持流感病毒高效繁殖的新型MDCK细胞系,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tpl2基因敲除的MDCK细胞,绘制其细胞生长曲线;根据《中国药典》第三部,对细胞进行形态检查、内外源因子和致瘤性检测;流感病毒接种细胞(MOI=0.1),测定12 h、24 h、48 h、72 h细胞培养上清的血凝滴度及72 h TCID50滴度。结果:靶基因组测序结果显示,获得一株稳定敲除Tpl2的MDCK细胞(MDCK-Tpl2-/-);其与亲本细胞生长速度无显著差异,均为贴壁、上皮样细胞形态;细胞内细菌、真菌、支原体、病毒及致瘤性检测均为阴性;病毒接种后12 h、24 h、48 h、72 h,MDCK-Tpl2-/-细胞培养上清的血凝效价提高了1.78-2.5倍。病毒接种后72 h,MDCK-Tpl2-/-细胞培养上清病毒的TCID50滴度提高了2.8倍。结果表明,利用Tpl2缺陷型MDCK细胞系可以提高流感病毒产量,为提升疫苗质量奠定基础。

提交时间: 2018-11-08 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量22下载量14 评论 0

7. chinaXiv:201811.00047 [pdf]

M145F/F146M突变对光受体蛋白细菌视紫红质和古紫质4光循环的影响

杨雅楠; 孙超; 崔浩琳; 赵欣
分类: 生物学 >> 生物工程

古紫质4(archaerhodopsin 4, aR4)与细菌视紫质(bacteriorhodopsin, bR)同属于盐杆菌科,同源性59%,均为光驱质子泵。其功能是在光照条件下将质子由胞内泵到胞外形成跨膜质子梯度,该梯度差被膜上另外一种蛋白ATP合成酶用于ATP的合成,从而完成光能向生物能的转化。aR4和bR具有相似的光循环过程,但质子传递时序不同,aR4是先从胞内吸收质子再将质子释放到胞外,而bR恰好相反。甲硫氨酸-145是位于bR视黄醛发色团键合区的一个重要残基,对其光循环有着重要的影响,而在aR4中处在相应位置上的苯丙氨酸-146是其视黄醛键合区与bR唯一不相同的残基。因此通过定点突变,采用紫外可见吸收光谱、动力学光谱、质子泵功能检测、低温透射红外光谱等手段对比分析研究M145F和F146M单点突变对bR和aR4光循环造成的影响,有助于深入理解aR4结构与功能的关系。研究结果表明,M145F突变造成了bR光循环L的丢失和质子泵功能的减弱,而F146M突变并未对aR4的光循环造成显著影响,且突变后aR4质子释放时序没有反转,表明该位置上的残基在两个体系中的作用不尽相同。

提交时间: 2018-11-08 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量16下载量11 评论 0

8. chinaXiv:201811.00007 [pdf]

全球单克隆抗体药物研发现状及发展趋势

高倩; 江洪; 叶茂; 郭文娟
分类: 生物学 >> 生物工程

单克隆抗体药物以其独特的作用机制及高效性,在恶性肿瘤和自身免疫疾病的治疗中发挥了不可估量的重要作用,成为全球的研发热点。基于科睿唯安旗下的Cortellis数据库,采用定量分析和专家智慧相结合的方法,从总体研发和商业化现状、主要国家/地区、技术和种类、靶点及作用机制、市场份额、产品交易多个维度展现出全球单克隆抗体药物的研发和商业化全景。分析结果显示:全球已上市的单克隆抗体药物有133个,其中已上市的人源化单克隆抗体药物占已上市的单克隆抗体药物总数的37.6%。作用靶点主要集中在HER、TNF、CD20、PD-1/L1、VEGF以及CD3,其中作为HER2酪氨酸激酶受体抑制剂的药物数量最多。美国在单克隆抗体药物研发和商业化方面遥遥领先,中国在研和上市的单抗隆抗体药物总数排名第二,但中国上市的单抗隆抗体药物数量仅8个。2017年销售额高于10亿美元的单克隆抗体药物有22个。全球单克隆抗体药物的交易数量共有1408次,药物开发与商业化许可是最主要的交易方式。未来,单克隆抗体药物的发展趋势将朝着新靶点、新适应症和新用药方案的方向发展,将会产生更多“重磅炸弹药物”。

提交时间: 2018-11-05 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量105下载量52 评论 0

9. chinaXiv:201811.00008 [pdf]

糖工程发展态势分析

王倬; 刘洪涛; 尹恒; 杜昱光
分类: 生物学 >> 生物工程

糖工程是研究糖类物质的结构、功能、制备技术及其应用的一门学科。近30年,随着糖链功能研究技术手段的不断进步,大量的糖链结构及其生物学功能被阐明,糖链与生长、发育、疾病过程的密切关系被逐步揭示,以此为基础的糖生物工程的基础与应用研究蓬勃发展,已成为继基因工程、蛋白质工程之后,最为引人注目的新生物技术领域。当前国内外糖工程研究方兴未艾,对该领域的综述论文并不鲜见,但多侧重于对基础理论研究的讨论。本文着重介绍糖工程技术及产业化发展的状况,重点论述近年来我国糖工程的主要产品、市场状况、国内外研发动向及糖工程科技创新情况,并讨论了我国糖工程发展面临的机遇与挑战,为从事糖工程教学、科研及应用开发的广大学者、科研工作者及产业技术人员提供参考。

提交时间: 2018-11-05 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量106下载量56 评论 0

10. chinaXiv:201810.00235 [pdf]

辣木叶乙醇提取物对非酒精性脂肪肝小鼠模型血脂和氧化应激影响的研究

戴丽芬; 陆艳华; 张曼; 田福璐
分类: 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学

以低(5 mg/kg),中(30 mg·kg-1)和高(60 mg·kg-1)的辣木叶乙醇提取物(EE-MO)干预高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠动物模型。结果发现,高剂量的EE-MO显著降低NAFLD小鼠的体重和肝湿重。EE-MO剂量依赖性地降低NAFLD小鼠血清TC,TG,HDL-C和LDL-C含量。高剂量的EE-MO除降低上述生化指标外,还显著降低血清中FFA含量。HE和苏丹III染色结果表明,EE-MO处理后,模型组小鼠的肝脂肪病变和细胞损伤得到显著改善。EE-MO对NAFLD小鼠模型的血脂代谢具有改善作用。此外,还发现高脂饮食诱导小鼠肝脏和血清ROS和MDA含量,诱导SOD,POD和CAT活性增加,降低GSH-Px活性。低,中和高剂量的EE-MO剂量依赖的降低NAFLD小鼠肝脏和血清的ROS和MDA含量,缓解氧化胁迫。低剂量EE-MO对SOD,POD,CAT和GSH-Px酶活性无显著影响。中和高剂量的EE-MO处理后,NAFLD小鼠的SOD,POD和CAT酶活性

提交时间: 2018-10-26 来自合作期刊:《广西植物》 点击量123下载量69 评论 0

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