抗树鼩CD3ε单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-02-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

徐婧雯 张雪梅 吴忠香 朱文兵 蒋曦 巩蔚 严丽蔚 宋杰 李慧 董少忠

摘要： 目的 制备鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体，并对其生物学特性进行鉴定。方法 以GST-CD3ε蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术融合免疫后的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞，通过间接ELISA方法检测，筛选出多株能分泌抗树鼩CD3ε的杂交瘤细胞株，经过3次亚克隆筛选后，制备小鼠腹水单克隆抗体，并纯化得到鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体，通过腹水单克隆抗体效价测定、单克隆抗体亲和力测定、单克隆抗体抗原表位分析、 Western blot和FACS分析其生物学特性。结果 筛选到5株能稳定分泌抗树鼩CD3ε单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为78I、87I、92D1、75II和35C8，腹水单克隆抗体效价分别为1:106、1:106、1:104、1:106、1:103，亲和力解离常数（Kd）分别为1.8×10-5、2.9×10-5、4.9×10-5、7.3×10-5、3.6×10-5。5株单克隆抗体抗原表位分析显示78I、87I和75II识别同一抗原表位，而92D1和35C8识别另一抗原表位。经Western blot检测，HRP标记后的92D1能识别GST-CD3ε蛋白和树鼩PBMC，并对大鼠、小鼠和猴的PBMC有抗体交叉反应。经FACS检测，PE-Cy5.5标记后的92D1能特异性识别树鼩PBMC。结论 成功制备出鼠抗树鼩CD3ε的单克隆抗体，为进一步应用于树鼩免疫检测奠定基础。

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