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1. chinaXiv:201808.00001 [pdf]

脐带间充质干细胞制剂生产及相关要求

王佃亮
分类: 生物学 >> 生物工程

美国食品药品管理局批准了世界上第一个干细胞药物Prochymal。脐带间充质干细胞药物已被韩国食品药品管理局批准上市。脐带间充质干细胞制剂具有良好的临床应用前景,可用于治疗一些常规治疗手段无效或治疗效果不好的疾病,如系统性红斑狼疮、糖尿病、小儿自闭症、颅脑损伤、退行性关节炎以及膝关节软骨损伤等。脐带间充质干细胞制剂又称脐带间充质干细胞注射液,它的生产应遵循《药品生产质量管理规范》(GMP)的基本原则、相关规定和规范性文件以及其他一些要求,对生产流程的各个环节也有严格要求。脐带间充质干细胞制剂的生产流程包括脐带采集、分离纯化、干细胞鉴定、规模化扩增、注射液配制、分装、包装、贴标签等一系列步骤,最后生产出来的脐带间充质干细胞制剂产品需要保存在-196℃液氮中,使用前再进行复苏。

提交时间: 2018-08-06 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量135下载量58 评论 0

2. chinaXiv:201808.00002 [pdf]

中间锦鸡儿CiMYB15基因正调控拟南芥黄酮代谢

柴文娟; 杨杞; 李国婧; 王瑞刚
分类: 生物学 >> 生物工程

R2R3-MYB类转录因子参与调控植物初生和次生代谢。本研究从中间锦鸡儿(Caragana intermedia)干旱转录组数据库中搜索并克隆了一个R2R3-MYB基因,命名为CiMYB15(GenBank登录号MH678649);将CiMYB15基因编码区转入野生型拟南芥中,利用分光光度法测定了野生型和转基因拟南芥中总黄酮含量,并用qRT-PCR检测了转基因植物中AtCHS基因的表达情况。同时采用染色体步移法克隆了CiMYB15基因的启动子序列。结果表明:(1)CiMYB15基因gDNA长度为1960 bp,包含三个外显子(134、131和521 bp)和两个内含子(281和893 bp);开放阅读框长度为786 bp,编码262个氨基酸。(2)克隆得到1580 bp的启动子序列,序列中主要包含损伤诱导元件G-box和P-box、盐诱导作用元件GT1-motif、参与干旱诱导的反应元件MBS,以及真菌侵害应答元件BOX-W1、植物-病原菌互作元件EIER;此外,还包含调节黄酮合成基因的MYB转录因子的结合位点。(3)CiMYB15基因的表达受到紫外胁迫的诱导。(4)CiMYB15基因过表达株系的总黄酮含量高于野生型。(5)过表达植物中AtCHS基因的表达量亦高于野生型。以上结果说明,CiMYB15基因正调控拟南芥黄酮代谢。

提交时间: 2018-08-06 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量118下载量49 评论 0

3. chinaXiv:201808.00004 [pdf]

‘贵长’猕猴桃叶片高效直接再生体系的建立

赵许朋; 赵晓朋; 施豪; 陈学梅; 姜婷; 刘燕
分类: 生物学 >> 生物工程

以‘贵长’猕猴桃叶片为外植体,直接脱分化产生不定芽,并对不定芽增殖以及生根体系进行优化,建立了其高效直接再生体系。结果表明,叶片在MS+4.0 mg/L #31;6-BA+0.4 mg/L NAA培养基中,不定芽诱导率达95.8 %,平均出芽数达15.7个/叶片;不定芽在MS+3.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.2 mg/L GA3培养基中,增殖率达100 %,且1~6代平均繁殖系数达8.15;不定芽先在添加1.0 mg/L IBA的1/2 MS固体培养基中诱导7 d,然后再先后在1/2 MS固体培养基和充分吸附1/2 MS培养液的珍珠岩中各培养14 d,生根率达98.61 %,且根系发育良好;50株试管苗移栽到以珍珠岩和田间土壤(其体积比为1:4)为基质的营养钵中,2周后成活49株,成活率达98 %。该研究成功建立了‘贵长’猕猴桃叶片高效再生体系,该方法不定芽诱导周期短,出芽率高且数目多,不定芽增殖系数大,生根率高且试管苗根系发达,为‘贵长’猕猴桃离体快速繁殖和遗传转化奠定了基础。

提交时间: 2018-08-06 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量99下载量51 评论 0

4. chinaXiv:201808.00005 [pdf]

全球免疫细胞治疗药物开发现状与趋势

王跃; 王恒哲; 毛开云; 范月蕾; 江洪波
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:从产品开发角度分析免疫细胞治疗类药物的发展现状和未来趋势。方法:检索科睿唯安(Clarivate Analytics)的Cortellis数据库的数据,利用定量分析法和对比分析法对检索结果进行分析。结果:目前已有2种免疫细胞治疗类药物上市,1种免疫细胞治疗类药物处于预注册阶段,4种药物处于临床III期,同时大量处于临床II/I期药物显示未来市场上将有更多免疫细胞治疗类药物。产品交易方面,目前在免疫细胞治疗类药物的商业交易也趋向频繁。目前已发生的交易中,本文列举分析了交易金额前十的交易,其中药物开发及商业化许可是最主要的交易模式。结论:目前免疫细胞治疗类药物市场尚处于起步阶段,但随着未来技术的不断发展改进,相信未来有更多的药物进入商用市场,为癌症及其他疾病的治疗提供新的契机。

提交时间: 2018-07-31 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量104下载量51 评论 0

5. chinaXiv:201807.00068 [pdf]

钙库调控的钙通道Orai1体外研究方法的建立

武福云; 姚美连; 吴胜英; 汪雄; 李珊
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:建立钙通道Orai1的体外研究方法。方法:利用脂质体重组技术,将体外纯化的Orai1蛋白重组到脂质体膜上,并利用蔗糖密度梯度离心来检测其重组效率及Orai1蛋白在脂质体膜上的结构,并利用钙染料Fura-2检测脂质体内钙离子的释放。结果:成功制备了脂质体及体外纯化了GST-Orai1融合蛋白,蔗糖密度梯度离心结果证明GST-Orai1蛋白成功重组到脂质体上,以及Orai1蛋白以多聚体的形式定位在脂质体膜上。钙离子释放实验证明脂质体内钙离子包装完好,可用于后续Orai1钙通道的功能研究。结论:利用脂质体重组技术建立了一种新的Orai1的研究方法,能够更直接有效地研究其功能及其活化机制。

提交时间: 2018-07-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量658下载量142 评论 0

6. chinaXiv:201807.00069 [pdf]

CRISPR/Cas系统作为抗菌药的现状及展望

曾家伟; 侯国锋; 郑继平; 杨诺; 曾纪峰; 郭桂英
分类: 生物学 >> 生物工程

抗生素长期滥用导致了人体内菌群失调及细菌耐药性的产生,因此需要寻找新型、靶向抗菌方法来治疗耐药细菌的感染。近年来,CRISPR/Cas系统的深入研究为设计特异性靶向耐药基因,定向清除耐药细菌的药物提供了新的思路。在此,本文介绍了CRISPR/Cas系统作为新型抗菌方法,通过靶向切割抗性质粒或细菌基因组以实现对耐药基因或病原菌的特异性清除,并对CRISPR抗菌药的不同类型核酸酶的选择,以及CRISPR递送系统的运载工具进行了评价。

提交时间: 2018-07-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量704下载量169 评论 0

7. chinaXiv:201807.00070 [pdf]

利用CRISPR/Cas9技术构建AEG-1基因敲除U251细胞系并探讨其转移行为的特点

盛玉瑞; 李斌; 王斌; 左娣; 马琳; 任晓璠; 郭乐; 刘昆梅
分类: 生物学 >> 生物工程

星形胶质细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)在多种肿瘤中过表达,参与肿瘤的形成、转移等过程。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除AEG-1基因并研究其在胶质瘤细胞转移过程中的作用。首先设计构建sgRNA/Cas9二合一表达载体并转染到人胶质瘤U251细胞中,通过TA克隆测序鉴定sgRNA的活性;然后筛选建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,并利用Western blot实验检测AEG-1的敲除效率;最后利用Transwell小室、划痕实验评价AEG-1敲除后对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果显示,成功构建靶向敲除AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体,所构建的载体与实验设计相一致,通过TA克隆测序鉴定sgRNA有活性;成功建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,Western blot实验结果表明敲除效率高达98%;Transwell小室实验、划痕实验结果表明AEG-1敲除U251细胞系的转移能力明显降低。

提交时间: 2018-07-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量497下载量135 评论 0

8. chinaXiv:201807.00071 [pdf]

脐带间充质干细胞的发现研究及规模化生产

王佃亮
分类: 生物学 >> 生物工程

脐带间充质干细胞来源于人体脐带组织,具有自我复制更新和多向分化潜能,是一种具有许多优势的干细胞类型,可用于治疗老年性退变、帕金森、血管缺血、小儿自闭症、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、多发性神经硬化症、糖尿病、各种创伤、移植物抗宿主病等常规治疗方法难以治愈的疾病,并且治疗效果明确。本文介绍了脐带间充质干细胞的研究发现历程,临床应用价值,分离制备和检测鉴定方法,生物学特性以及规模化生产技术。需要强调的是,脐带间充质干细胞具有比其他一些干细胞(如脐带造血干细胞、骨髓造血干细胞、骨髓间充质干细胞等)没有的优势,材料来源广泛,细胞增殖能力强,没有伦理问题。脐带间充质干细胞的生产和应用应遵循政府或机构颁布的相关法律法规和标准规范。

提交时间: 2018-07-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量471下载量143 评论 0

9. chinaXiv:201807.00072 [pdf]

云南德宏傣族传统村落植物景观及应用研究

周静帆; 欧杨; 周丽; 刘昕岑; 包蓉
分类: 生物学 >> 植物学

传统村落的植物景观,反应了一个民族在长期实践中积累的植物认知和应用经验,兼具地域自然性与文化性,从而对村落生态环境建设及民族植物的可持续性利用具有重要参考意义。该研究对云南省德宏州大盈江、瑞丽江流域的19个傣族传统村落进行植物景观及应用调查。结果表明:德宏傣族传统村落植物景观水平分布为寨外(山林绿块+农田绿块+护堤绿带)——寨边(防护绿环+高山榕绿块)——寨内(绿点+绿线)的格局;垂直分布有5个景观层次;村寨内常见植物共181种,73科;村寨内植物多为人工栽培,具较强实用性,主要应用功能集中在食用、药用、观赏、防护隔离、香薰调味等方面;傣寨植物人文景观具宗教色彩。建议加强植物水平分布的空间联系,建立稳定的绿地系统格局;保持植物垂直景观层次,推广植物的建造功能应用;充分利用植物资源,形成产业优势;传承优秀的植物文化景观。最终,推广植物在村落建设中的传统应用经验,促进民族村落与植物的可持续保护与发展。该研究成果对德宏傣族人居环境建设与民族植物学应用提供了科学依据。

提交时间: 2018-07-13 来自合作期刊:《广西植物》 点击量599下载量203 评论 0

10. chinaXiv:201807.00038 [pdf]

S100A9参与乙型肝炎病毒X蛋白介导的HepG2细胞增殖与迁移

张秀瑜; 王玎; 杜燕娥; 武睿; 段亮
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:探讨S100A9在乙型肝炎病毒X(HBx)介导的HepG2细胞增殖及迁移中的作用。方法:用表达HBx蛋白的重组腺病毒AdHBx感染HepG2细胞后,用CCK-8实验检测细胞增殖能力及划痕愈合实验检测细胞迁移能力;在HepG2/AdHBx细胞中转染S100A9-siRNA及其对照siRNA后,检测HepG2细胞增殖及迁移能力;在HepG2/AdHBx和对照组HepG2/AdGFP细胞中,采用Real- time PCR及Western Blot检测S100A9基因及蛋白的表达情况;在HepG2/AdHBx细胞中,加入不同剂量的NF-κB抑制剂BAY11-7082后,检测各组中S100A9的基因及蛋白表达情况。结果:HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移;S100A9-siRNA抑制S100A9的表达后,HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移的作用降低,HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移部分依赖于S100A9;S100A9基因及蛋白表达在HepG2/AdHBx中较对照组HepG2/AdGFP显著升高,HBx可致S100A9表达增加;抑制NF-κB转录活性后,AdHBx+BAY11-7082组S100A9基因及蛋白表达较对照组显著降低,阻断NF-κB转录活性可部分抑制HBx调控的S100A9表达。结论:HBx可调控S100A9的表达且与NF-κB活化有关, S100A9参与 HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移。

提交时间: 2018-07-11 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量854下载量134 评论 0

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