分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-02-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 该研究探究了JNK通路对M2巨噬细胞极化及M2介导的促肿瘤效应的影响。构建单核细胞THP1来源M2 巨噬细胞模型(THP1-M2) ，将细胞分为4 组: 用PMA 诱导的未活化巨噬细胞组( M0) ，用PMA，IL-4处理及阴性干扰（DMSO）的M2型巨噬细胞组( M2)，用特异性抑制剂阻断JNK通路的M2 型巨噬细胞组( M2-JNK I)。实时荧光定量PCR检测M2 表型marker基因的表达；免疫蛋白印迹法检测M2 表型marker蛋白水平；细胞划痕试验检测巨噬细胞迁移能力；流式细胞数检测786O及OSRC2凋亡。结果与THP1-M2组相比，阻断JNK通路的M2组M2表型marker表达明显下降，同时其细胞迁移能力也呈下降趋势。且阻断JNK通路后，M2巨噬细胞抑制肾癌细胞凋亡的能力减弱。该研究结果表明，抑制JNK通路后，M2巨噬细胞极化状态受损，其促肿瘤效应可转变为抗肿瘤效应。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-02-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： NAC转录因子家族是植物特有的、最大的转录因子家族之一，参与植物生物胁迫和非生物胁迫应答、激素信号转导、植物次生生长、细胞分裂和植物衰老等多种过程，在植物生长发育过程中起着重要的作用。本实验以中间锦鸡儿CiNAC1基因的过表达拟南芥纯合体株系为材料，以野生型为对照，对CiNAC1基因功能进行分析。结果发现，乙烯处理后，CiNAC1基因过表达株系与野生型拟南芥相比，叶片衰老提前、叶绿素含量降低、离子渗透率升高。实时荧光定量PCR检测发现，乙烯处理后CiNAC1基因过表达株系中与叶绿素降解相关的基因SGR1、SGR2、PPH，以及与衰老相关的基因SAG13、SAG29、ORE1、SINA1 、VNI2和乙烯信号途径中的重要转录因子EIN3的表达量均明显高于野生型拟南芥。表明CiNAC1基因在乙烯诱导的叶片衰老过程中发挥重要作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-02-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的 制备鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体，并对其生物学特性进行鉴定。方法 以GST-CD3ε蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术融合免疫后的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞，通过间接ELISA方法检测，筛选出多株能分泌抗树鼩CD3ε的杂交瘤细胞株，经过3次亚克隆筛选后，制备小鼠腹水单克隆抗体，并纯化得到鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体，通过腹水单克隆抗体效价测定、单克隆抗体亲和力测定、单克隆抗体抗原表位分析、 Western blot和FACS分析其生物学特性。结果 筛选到5株能稳定分泌抗树鼩CD3ε单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为78I、87I、92D1、75II和35C8，腹水单克隆抗体效价分别为1:106、1:106、1:104、1:106、1:103，亲和力解离常数（Kd）分别为1.8×10-5、2.9×10-5、4.9×10-5、7.3×10-5、3.6×10-5。5株单克隆抗体抗原表位分析显示78I、87I和75II识别同一抗原表位，而92D1和35C8识别另一抗原表位。经Western blot检测，HRP标记后的92D1能识别GST-CD3ε蛋白和树鼩PBMC，并对大鼠、小鼠和猴的PBMC有抗体交叉反应。经FACS检测，PE-Cy5.5标记后的92D1能特异性识别树鼩PBMC。结论 成功制备出鼠抗树鼩CD3ε的单克隆抗体，为进一步应用于树鼩免疫检测奠定基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-02-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：制备负载NGF的可注射壳聚糖透明质酸复合水凝胶，探讨其理化性能以及生物相容性。方法：首先京尼平交联制备壳聚糖透明质酸复合水凝胶材料，采用倒置法检测凝胶时间；扫描电镜观察材料形态结构；NGF释放实验、体外溶胀以及降解实验等检测凝胶材料的物理化学性能；通过MTT实验、NGF活性检测、材料与细胞共培养检测凝胶材料生物学性能。结果：在37℃条件下，可注射凝胶材料凝胶时间在37min左右，凝胶材料为多孔网络状结构，凝胶材料8周最多能够降解76％，缓释21天的NGF具有生物活性，凝胶材料能促进RSC96细胞的粘附、增殖、迁移以及细胞活性物质的释放。结论：京尼平交联的壳聚糖透明质酸水凝胶具有良好的生物相容性，能作为NGF的载体材料，具有成为神经导管内填充材料的潜能。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-02-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： Sp2/0是一种生产单克隆抗体的常用细胞株。本研究首先在批次培养模式中对适合Sp2/0细胞生长的5种基础培养基、摇床转速、培养温度、二氧化碳浓度、微量元素和GlutaMAXTM替换谷氨酰胺等影响因素进行了筛选研究。结果显示Sp2/0细胞在批次培养中细胞密度最高值达到13.12x106 cells/mL，培养时间为7天。除培养温度会导致不同的细胞生长密度和活率、进而影响培养时间外，其它因素不能导致明显的细胞生长差异。随后在流加培养模式下就14种补料组合进行了筛选，Sp2/0在流加培养模式下细胞的峰值密度可达20-30x106 cells/mL，培养时间9天，单克隆抗体Mab-A日产量最高达到27.20 mg/L。最后应用批次-反复流加培养模式培养Sp2/0细胞，该条件下峰值细胞数为50.42x106 cells/mL，培养时间14天，每天单抗产量（141.10 mg/L）是流加培养的5.19倍。这些研究结果为Sp2/0细胞规模化生产单克隆抗体奠定了一定基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-02-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 众所周知，葡萄糖及脂肪酸是胰岛β细胞的关键代谢底物，葡萄糖刺激胰岛β细胞分泌胰岛素是维持机体血糖稳态平衡的关键。胰岛素抵抗发生时，β细胞对能量代谢底物的选择失调，加速胰岛β细胞由代偿到胰岛β细胞失代偿的进程，是肥胖胰岛素抵抗最终发展为2型糖尿病的始动因素。核转录因子FoxO1属于Fox家族成员，在胰腺内广泛表达，在β细胞的代谢，发育，增殖过程中发挥着重要的调节作用。鉴于FoxO1在维持胰岛β细胞功能中的关键作用，现着重对FoxO1在胰岛β细胞代谢灵活性受损及失代偿过程发生中的作用调节进行阐述。为其作为调控胰岛β细胞功能的关键靶点提供参考。
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