Current Location:home > Browse

1. chinaXiv:201812.00148 [pdf]

家蝇抗菌肽AMPs17蛋白原核表达条件的优化及其抗真菌活性检测

杨隆兵; 国果; 马慧玲; 李妍; 赵欣宇; 苏佩佩; 张勇
Subjects: Biology >> Bioengineering

目的:优化AMPs17重组蛋白的原核表达条件,分析重组蛋白的抗真菌活性。方法:比较不同的诱导温度(25 ° C, 28 ° C, 30 ° C, 32 ° C, 34 ° C)、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度(0.025、 0.05、0.1、0.3、0.5、0.8、1.0mmol·L-1)和诱导时间(12h、15h、18h、21h、24h)对AMPs17重组蛋白表达量的影响,筛选AMPs17重组蛋白的最佳表达条件;采用镍离子金属螯合剂亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,SDS-PAGE电泳和ImageJ图像分析系统对表达结果进行分析,Western bolt对AMPs17重组蛋白鉴定,高效液相色谱分析重组蛋白的纯度,微量液体稀释法及菌落计数法检测其抗真菌活性。结果:在诱导温度为32℃、IPTG浓度为0.05mmol·L-1的条件下诱导培养15h,AMPs17重组蛋白的表达量最高且最为稳定;HPLC色谱仪分析显示AMPs17重组蛋白纯度可达到90%以上;优化后的AMPs17重组蛋白能有效抑制白色念珠菌的生长。结论:本研究优化了家蝇抗菌肽AMPs17的诱导表达条件,获得了高表达、稳定且具有抗真菌活性的蛋白,为后续抗菌机制及应用研究提供一定的实验基础。

submitted time 2018-12-16 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits2463Downloads959 Comment 0

  [1 Pages/ 1 Totals]