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1. chinaXiv:201806.00247 [pdf]

利用GAP启动子在毕赤酵母中组成型表达人鹅型溶菌酶2

黄 鹏; 闫丽萍; 张宁; 石金磊
Subjects: Biology >> Bioengineering

利用甘油醛三磷酸脱氢酶(glyceraldehydes-3-phosphatedehydrogenase,GAP)启动子在毕赤酵母中表达人鹅型溶菌酶2(human goose-type lysozyme 2,hLysG2),并在小试规模建立一套有效的重组hLysG2(recombinant hLysG2,rhLysG2)生产工艺流程。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成hLysG2基因,将其连接至pGAPZαA 质粒中,构建重组表达质粒pGAPZαA-hLysG2。将重组表达载体线性化后电转化毕赤酵母GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性筛选获取高拷贝重组菌株,并在5L生物反应器中进行发酵培养。发酵60 h后发酵液上清酶活性达到最高, 发酵液上清经SDS-PAGE及Western blot检测证实rhLysG2得到表达。与诱导型表达相比,组成型表达发酵时间缩短了48 h,上清中rhLysG2总活性提高了23.8%;使用甲壳素亲和层析和分子筛层析对rhLysG2进行纯化后,每升发酵液上清可纯化到187.4 mg重组蛋白,纯化产物纯度达99.0%以上;浊度测定法分析显示,在pH 5.6、30 ℃和0.1 mol/L Na+的条件下,rhLysG2可达到最大酶活性13500 U/mg。利用GAP启动子在毕赤酵母中成功表达了高纯度和高活性的rhLysG2,避免了甲醇的使用,缩短了发酵时间,提高了蛋白产量,为将rhLysG2开发为新型抗耐药菌药物奠定了基础。

submitted time 2018-06-27 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits2396Downloads981 Comment 0

2. chinaXiv:201805.00340 [pdf]

不同供水下白羊草(Bothriochloa ischaemum)离体根呼吸特征——基于稳定碳同位素示踪技术

刘琦; 李鹏; 刘莹; 肖列; 黄鹏; 汤珊珊
Subjects: Biology >> Ecology

植物根呼吸是土壤呼吸的主要组成,研究根呼吸对生态系统碳收支及碳平衡有重要意义。采用13C脉冲标记技术,在3种供水条件下,对比不同根离体时间(标记后0,6,24,48,216,360 h)的白羊草离体根呼吸速率和根呼吸释放的δ13C同位素比值变化,分析根参数与离体根呼吸相关性。结果表明:1)不同离体时间的离体根呼吸速率变化趋势一致,3种供水条件下无显著差异,均在0-20 min急剧下降,下降范围为32%-39%。2)测定离体根呼吸释放的δ13C在不同离体时间的变化,为实时监测转移到白羊草根系的13CO2在根部释放的过程提供了新思路;不同离体时间,3种供水条件下根呼吸释放的δ13C在2 h内均值大小呈:供水充分 > 轻度胁迫 > 重度胁迫。随离体时间(0-360 h)推移根呼吸释放的δ13C均值先增大后减小,在216 h达到峰值31.46‰;3)离体根呼吸速率和根呼吸释放的δ13C受根系根面积、比根面积、N含量、C/N及根组织δ13C的影响显著。4)轻度水分胁迫可促使根系生长(C固定)和根呼吸(C代谢)同时增加。

submitted time 2018-05-18 From cooperative journals:《生态学报》 Hits1195Downloads642 Comment 0

3. chinaXiv:201801.00307 [pdf]

人源类溶菌酶蛋白6的功能研究及生理特性分析

黄鹏; 杜望春; 施尉珺; 饶玉良; 孙庆文; 张宁
Subjects: Biology >> Bioengineering

对人源类溶菌酶蛋白6(human lysozyme-like protein 6,LYZL6)在受精过程中的作用进行研究,并对重组LYZL6蛋白(recombinant LYZL6,rLYZL6)的生理特性进行分析,从而揭示其生理功能。细胞免疫荧光法确定LYZL6定位于成熟精子头部的顶体后区域,反转录PCR(RT-PCR)分析表明精子表面的LYZL6蛋白来源于睾丸和附睾的分泌,Western blot法分析表明精子获能前后表面LYZL6的量无明显改变。半透明带结合实验和精子穿透实验分析表明兔抗LYZL6血清未明显抑制人精子结合透明带,但可明显抑制精卵融合。利用毕赤酵母表达系统成功表达了rLYZL6,使用甲壳素亲和层析和凝胶过滤层析可从发酵上清中纯化到具有生物活性的rLYZL6。酶联免疫吸附法(ELISA)分析显示rLYZL6不具有透明质酸结合能力、透明质酸水解能力和自由基清除活性,但具有较强的肽聚糖结合能力和异肽酶活性。LYZL6由睾丸和附睾分泌后定位于成熟精子头部的顶体后区域,可以参与精卵融合,并具有肽聚糖结合能力和异肽酶活性,提示LYZL6可能通过多种机制参与精子功能。

submitted time 2018-01-12 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits2280Downloads905 Comment 0

4. chinaXiv:201712.00934 [pdf]

石蒜碱对肾癌细胞ACHN的具有明显的抗肿瘤作用

黄义强; 张一鸣; 金中; 李协照; 王崇山; 许凯; 黄鹏; 刘春晓
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 探讨石蒜碱对肾癌细胞ACHN的作用及可能机制。方法 流式细胞仪分析石蒜碱对ACHN细胞周期及凋亡的影响;MTS检测石蒜碱对ACHN细胞增殖的作用;划痕实验、Transwell实验检测石蒜碱对ACHN细胞迁移、侵袭能力的影响;平板克隆形成检测石蒜碱对ACHN细胞集落形成能力的影响;qRT-PCR分析基因转录的变化;Western blotting分析蛋白表达水平的变化。结果 石蒜碱对 ACHN半数抑制浓度为 24.34 μmol/L。石蒜碱能将肾癌 ACHN细胞剂量依赖性阻滞于 G0/G1期(P<0.01);与正常对照组相比,5 μmol/L石蒜碱即能诱导ACHN细胞凋亡(P<0.01)、抑制ACHN细胞增殖(P<0.01);处理后ACHN细胞迁移能力(P<0.01)、侵袭能力(P<0.01)显著下降、集落形成能力亦呈剂量依赖性降低。qRT-PCR及 Western blotting显示 5 μmol/L的石蒜碱即能在基因及蛋白水平上调CDK4、Bax表达,而下调CyclinD1、Bcl-2、Survivin的表达;caspase-3基因表达增加,caspase-3蛋白水平变化却不甚明显。结论 石蒜碱对肾癌ACHN细胞具有明显的抗肿瘤效应,该药可为肾癌的治疗提供新思路。

submitted time 2017-12-27 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits940Downloads559 Comment 0

5. chinaXiv:201712.00224 [pdf]

人源类溶菌酶蛋白6的功能研究及生理特性分析

黄鹏; 杜望春; 施尉珺; 饶玉良; 孙庆文; 张宁
Subjects: Biology >> Bioengineering

对人源类溶菌酶蛋白6(human lysozyme-like protein 6,LYZL6)在受精过程中的作用进行研究,并对重组LYZL6蛋白(recombinant LYZL6,rLYZL6)的生理特性进行分析,从而揭示其生理功能。细胞免疫荧光法确定LYZL6定位于成熟精子头部的顶体后区域,反转录PCR(RT-PCR)分析表明精子表面的LYZL6蛋白来源于睾丸和附睾的分泌,Western blot法分析表明精子获能前后表面LYZL6的量无明显改变。半透明带结合实验和精子穿透实验分析表明兔抗LYZL6血清未明显抑制人精子结合透明带,但可明显抑制精卵融合。利用毕赤酵母表达系统成功表达了rLYZL6,使用甲壳素亲和层析和凝胶过滤层析可从发酵上清中纯化到具有生物活性的rLYZL6。酶联免疫吸附法(ELISA)分析显示rLYZL6不具有透明质酸结合能力、透明质酸水解能力和自由基清除活性,但具有较强的肽聚糖结合能力和异肽酶活性。LYZL6由睾丸和附睾分泌后定位于成熟精子头部的顶体后区域,可以参与精卵融合,并具有肽聚糖结合能力和异肽酶活性,提示LYZL6可能通过多种机制参与精子

submitted time 2017-12-22 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits1967Downloads893 Comment 0

6. chinaXiv:201712.00291 [pdf]

BIM技术助力既有建筑改造项目提质增效

王丰碑; 黄鹏
Subjects: Civil Engineering and Building Construction >> Civil Construction Engineering

对既有建筑存在原有竣工数据资料缺失而影响项目改造的问题进行了研究,介绍了基于三维激光扫描的逆向工程技术、点云数据处理技术与BIM技术相结合,解决了上述问题并应用于项目设计与施工过程中,提高了设计方案的可行性,以及为既有建筑机电安装优化和净高控制提供了有效的解决手段。

submitted time 2017-12-21 From cooperative journals:《土木建筑工程信息技术》 Hits509Downloads258 Comment 0

7. chinaXiv:201712.00758 [pdf]

人Bcl-6 3'UTR区报告质粒及其表达载体的构建和功能检测

韩白玉; 崔瀚之; 燕翔; 黄鹏; 黄华龙; 范忠义; 窦京涛
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 通过构建bcl-6基因野生型、突变体3'UTR区及其编码序列(CDS),观察miR-127对bcl-6的直接靶向调控作用及bcl-6表达载体回复miR-127抑制细胞周期和细胞生长的功能。方法 利用PCR方法扩增bcl-6基因 3'UTR区序列及其CDS,分别构建在pcDNA3.0-Luc和pcDNA3.0-Flag载体上,在bcl-6基因3'UTR质粒基础上应用重组PCR方法构建miR-127结合位点突变的突变体报告基因质粒,应用荧光素酶报告基因系统检测miR-127对bcl-6的直接靶向调控作用,在肝癌细胞HepG2中检测过表达及敲低miR-127引起bcl-6基因表达抑制后细胞周期和细胞生长的改变,同时应用表达载体回复bcl-6蛋白水平,检测bcl-6在miR-127调控细胞周期和细胞生长中的必要性。结果 构建的重组质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确,bcl-6 3'UTR野生型和突变体报告质粒与miR-127共转293T细胞和HepG2细胞后荧光素酶报告基因检测显示miR-127明显降低野生型报告质粒的活性,但对突变体活性没有影响,miR-127可引起HepG2细胞G2/M期阻滞并抑制细胞生长,bcl-6可以逆转miR-127对细胞周期和细胞生长的影响。结论 成功构建bcl-6基因3'UTR区野生型、突变体报告质粒和bcl-6基因的表达载体,荧光素酶报告基因和回复实验证实均具有生物学功能。

submitted time 2017-12-07 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits666Downloads376 Comment 0

8. chinaXiv:201711.00742 [pdf]

乳源生物活性肽对动物肠道功能的影响及作用机制

周健; 熊霞; 李建中; 邓百川; 黄鹏飞; 印遇龙
Subjects: Biology >> Zoology

乳源生物活性肽(MDBPs)是指乳汁中存在的参与机体多种代谢途径和生理环节,具有特殊氨基酸排列和空间结构的相对较短的小分子肽段。近年的研究发现MDBPs能影响动物肠道黏膜营养物质吸收、减缓肠道氧化应激、改善肠道微生态环境以及提高肠道免疫力。本文将围绕MDBPs对动物肠道功能的影响及作用机制进行综述。

submitted time 2017-10-10 From cooperative journals:《动物营养学报》 Hits1240Downloads744 Comment 0

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