干扰PKM2对人白血病细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-11-25 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

汪路 杨丽媛 唐雨婷 陶瑶 雷力 敬一佩 蒋雪坷 张伶

摘要： 目的：本文旨在探讨糖酵解酶丙酮酸激酶M2型（PKM2）对人白血病细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法：将靶向PKM2的慢病毒载体转染人K562细胞株（shPKM2组），同时设立空载体转染组为对照（Vector组）。采用qRT-PCR和Western blot技术分别检测Vector组和shPKM2组PKM2 mRNA和蛋白的表达以及自噬标志物的变化；CCK-8实验检测细胞体外增殖能力；流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况；Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平。结果：在稳定干扰PKM2后，PKM2的mRNA（t=11.58，P=0.0003）和蛋白水平（t=11.88，P=0.0003）均明显降低。与Vector组比较，shPKM2组细胞体外增殖能力显著降低（F=118.87，P＜0.0001）。同时，干扰PKM2可使K562细胞周期阻滞在G1期，细胞凋亡率显著增加（t=37.23，P＜0.0001）；使促凋亡蛋白Bax表达增加（t=15.36，P=0.0001）、抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低（t=9.965，P=0.0006）。此外，干扰PKM2可减弱K562细胞自噬水平，表现为LC3II降低（tLC3II=10.32，PLC3II=0.0005），而p62水平增加（tp62=14.59，Pp62=0.0001）。还发现自噬诱导剂能逆转shPKM2引起的白血病细胞体外增殖能力减弱（F=96.32，P＜0.0001）。结论：以上结果表明干扰PKM2可抑制人白血病K562细胞的体外增殖并促进其凋亡，其机制可能与PKM2介导的自噬活性降低有关，提示PKM2可能作为白血病诊疗的一个潜在靶点。

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