分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-11-08 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：研究干扰素调节宿主限制性因子SAMHD1的表达而抑制HBV复制的分子机制。方法：首先不同剂量的干扰素α、β和γ处理Huh7.0细胞，通过荧光定量PCR和Western blot检测SAMHD1在转录和翻译后的表达水平；进一步通过siRNA干扰内源性的SAMHD1，再评价干扰素α、β对病毒的抑制效应；最后通过免疫荧光检测了干扰素α诱导内源性SAMHD1 的细胞定位及Southern blot检测了SAMHD1细胞定位对病毒复制的影响。结果：在Huh7.0细胞中，SAMHD1的RNA水平和蛋白表达明显受干扰素α和β的诱导升高；干扰SAMHD1后干扰素α和β对HBV复制的抑制作用消失；SAMHD1定位在细胞核内，干扰素α诱导SAMHD1同样定位在细胞核内，缺失核定位信号后SAMHD1丧失了其抑制病毒复制的作用。结论：在Huh7细胞中，干扰素α、β能诱导 SAMHD1表达上调来抑制HBV的复制，SAMDH1的抗病毒作用依赖于其细胞定位。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠体内淋巴细胞表型特点及干扰素α对其病毒学指标和免疫细胞表型的影响。方法 选取HBV 转基因小鼠和野生型（WT）小鼠，采用ELISA检测HBV转基因小鼠血清HBsAg和HBcAb水平及两组小鼠血清IL-21及IL-6水平，分离肝、脾以及外周血淋巴细胞，流式细胞术检测CD4+T和CD19+B细胞频数；给予9只HBV转基因小鼠重组鼠源性干扰素α（rmIFN-α）皮下注射，同时9只HBV转基因小鼠相应注射PBS，观察其血清HBsAg、HBV DNA、IL-6、IL-21水平的变化以及外周血CD4+T和CD19+B细胞频数变化。结果 HBV转基因小鼠的血清HBsAg水平较高并能检测到HBcAb，其血清IL-21及IL-6水平较WT小鼠显著升高（P<0.05）；HBV转基因小鼠外周血、肝脏以及脾脏淋巴细胞中CD4+T细胞频数较WT小鼠均明显低下（P<0.05），但其肝脏CD19+B细胞频数明显高于WT小鼠（P<0.05）；HBV转基因小鼠肝内CD4+T细胞频数与血清HBsAg水平呈负相关，而肝内CD19+B细胞频数与血清HBcAb水平呈正相关；rmIFN-α处理可显著提高HBV 转基因小鼠外周血CD4+T和CD19+B细胞频数以及血清IL-6水平（P<0.05）。结论 HBV转基因小鼠体内淋巴细胞亚群频数异常，外源性干扰素α可通过调节淋巴细胞亚群频数发挥免疫调节作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-06-14 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的 建立简便、快速、灵敏的锁核酸（Locked nucleic acid，LNA）探针实时荧光聚合酶链反应（PCR）检测方法，检测乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus ，HBV） 阿德福韦酯（Adefovir dipivoxil，ADV）耐药相关位点（rtA181V、rtN236T）突变。方法 通过基因测序筛选阳性样本，进而构建ADV rt181和rt236位点野生株和突变株重组质粒，设计包含扩增阿德福韦酯rtA181V和rtN236T耐药位点在内的特异性引物和LNA荧光探针，以构建的重组质粒为标准品建立实时荧光PCR反应体系，并通过与基因测序平行检测血清样本以判断检测方法的可行性与准确性。结果 本实验所建立的LNA-PCR法能够检测102 copies/mL的HBV中ADV基因突变，同时具备较高的特异性。通过对89例ADV治疗一年后HBV阳性临床样本进行检测，有8例（8.98%）rtA181V突变，5例（5.61%）rtN236T突变，2例（2.24%）rtA181V和rtN236T混合突变，检测结果与测序结果一致。结论：本实验所建立的LNA-PCR法是一种简便、快速、灵敏的基因突变检测方法，能有效的区分单碱基突变，对慢性乙型肝炎患者德福韦治疗过程中耐药突变的监控和抗病毒药物的调整具有指导意义。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2018-01-25 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 观察小鼠白细胞介素-21基因重组腺病毒（Ad-GFP-mIL-21）在慢性HBV感染小鼠中的表达以及其对病毒清除和 HBV特异性抗体产生的作用。方法 Ad-GFP-mIL-21体外感染HepG2.2.15细胞后分别采用ELISA和Western blot检测上清和 细胞mIL-21的表达；尾静脉注射 rAAV8-1.3HBV至野生型 C57BL/6 小鼠体内建立HBV持续表达模型， 12周后实验组尾静脉 注射Ad-GFP-mIL-21，以注射空载 GFP重组腺病毒或PBS为对照组，荧光显微镜观察Ad-GFP-mIL-21在小鼠体内各器官的表 达情况，ELISA检测各组小鼠血清HBsAg、HBsAb、HBcAb和mIL-21的水平。结果 Ad-GFP-mIL21可在体外感染HepG2.2.15 细胞，且上清mIL-21水平与重组载体的滴度和感染时间相关。注射Ad-GFP-mIL21至HBV持续表达小鼠后第4天观察到绿色 荧光主要在肝细胞表达；与处理前相比，注射第4天血清mIL-21水平显著升高（P<0.05）， 而HBsAg滴度则明显下降；实验组和 对照组小鼠在注射第13天血清HBsAb均为阴性；与对照组相比，实验组小鼠血清HBcAb水平显著升高（P<0.05）。结论 AdGFP-mIL-21在HBV持续感染小鼠体内可表达mIL-21，并能下调血清HBsAg滴度和促进HBcAb产生，提示其在体内具有控制 慢性HBV感染的作用。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《分子影像学杂志》
摘要： 目的 母婴乙肝病毒垂直传播已成为我国乙肝病毒感染的主要途径，本研究分析乙肝病毒感染的孕妇进行羊膜腔穿刺是否增加母婴垂直传播的风险。 方法 搜索1990年1月1日~2016年3月15日之间在Pubmed、Embase、谷歌学术和万方数据库等数据库中所有关于乙肝孕妇行羊膜腔穿刺对母婴垂直传播影响的相关英文或中文文章，根据纳入剔除标准对文章进行筛选，然后对文章治疗评分，最后有4篇文章纳入，共有3997孕妇，其中实验组167名、对照组3830名，使用Review ManagerVersion 5.0进行数据分析。 结果 荟萃分析结果显示，进行羊膜腔穿刺术与不行羊膜腔穿刺术两组婴儿HBs Ag阳性率无明显差异（R2=1.37，95% CI: 0.70~2.69，P=0.36）。当孕妇是HBV-DNA≥107 copies/m L、HBe Ag阳性时，进行羊膜腔穿刺术后胎儿宫内感染风险增加（R2=9.54，95% CI: 3.52~25.85，P<0.0004；R2=3.41，95% CI: 1.05~11.13，P=0.04）。 结论 孕妇HBV-DNA≥107 copy/m L和（或）HBe Ag阳性时将增加母婴垂直传播的风险。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-07-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：探讨S100A9在乙型肝炎病毒X（HBx）介导的HepG2细胞增殖及迁移中的作用。方法：用表达HBx蛋白的重组腺病毒AdHBx感染HepG2细胞后，用CCK-8实验检测细胞增殖能力及划痕愈合实验检测细胞迁移能力；在HepG2/AdHBx细胞中转染S100A9-siRNA及其对照siRNA后，检测HepG2细胞增殖及迁移能力；在HepG2/AdHBx和对照组HepG2/AdGFP细胞中，采用Real- time PCR及Western Blot检测S100A9基因及蛋白的表达情况；在HepG2/AdHBx细胞中，加入不同剂量的NF-κB抑制剂BAY11-7082后，检测各组中S100A9的基因及蛋白表达情况。结果：HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移；S100A9-siRNA抑制S100A9的表达后，HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移的作用降低，HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移部分依赖于S100A9；S100A9基因及蛋白表达在HepG2/AdHBx中较对照组HepG2/AdGFP显著升高，HBx可致S100A9表达增加；抑制NF-κB转录活性后，AdHBx+BAY11-7082组S100A9基因及蛋白表达较对照组显著降低，阻断NF-κB转录活性可部分抑制HBx调控的S100A9表达。结论：HBx可调控S100A9的表达且与NF-κB活化有关， S100A9参与 HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移。
点击量
点击量
下载量
评论
