分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要: 本试验通过建立过氧化氢(H2O2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型,研究谷氨酰胺(Gln)、甘氨酰谷氨酰胺(Gly-Gln)和丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)对凋亡细胞的凋亡率及Bcl-2、Bax基因表达量的影响。选用60日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞,采用不同浓度[0(对照组)、100、400、800 µmol/L]的H2O2培养细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。传代瘤胃上皮细胞分为5组,对照组和1组分别添加0、800 µmol/L H2O2,2组、3组、4组均添加800 µmol/L H2O2,同时分别添加17.28 mmol/L Gly-Gln(2组)、16.0 mmol/L Gln(3组)、16.0 mmol/L Ala-Gln(4组),应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测细胞Bcl-2、Bax基因表达量。结果显示:1)与对照组相比,当H2O2浓度增加到800 µmol/L时,早期凋亡的凋亡率显著增加(P<0.05),而晚期凋亡的凋亡率随着H2O2浓度的增加呈现增加后减少的趋势,但相对于对照组,都呈显著增加(P<0.05)。2)与对照组相比,4组晚期凋亡的凋亡率显著增加(P<0.05),试验组早期凋亡的凋亡率均显著增加(P<0.05)。3)与对照组相比,试验组Bcl-2/Bax均显著增加(P<0.05);与1组相比,2组、3组和4组Bcl-2/Bax均显著增加(P<0.05),且2组显著高于3组、4组(P<0.05)。综合得出,Gly-Gln对H2O2引起山羊瘤胃上皮细胞早期凋亡具有一定的保护作用。
分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要: 本试验通过建立过氧化氢(H2O2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型,研究谷氨酰胺(Gln)、甘氨酰谷氨酰胺(Gly-Gln)和丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)对凋亡细胞的凋亡率及Bcl-2、Bax基因表达量的影响。选用60日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞,采用不同浓度[0(对照组)、100、400、800 µmol/L]的H2O2培养细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。传代瘤胃上皮细胞分为5组,对照组和1组分别添加0、800 µmol/L H2O2,2组、3组、4组均添加800 µmol/L H2O2,同时分别添加17.28 mmol/L Gly-Gln(2组)、16.0 mmol/L Gln(3组)、16.0 mmol/L Ala-Gln(4组),应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测细胞Bcl-2、Bax基因表达量。结果显示:1)与对照组相比,当H2O2浓度增加到800 µmol/L时,早期凋亡的凋亡率显著增加(P<0.05),而晚期凋亡的凋亡率随着H2O2浓度的增加呈现增加后减少的趋势,但相对于对照组,都呈显著增加(P<0.05)。2)与对照组相比,4组晚期凋亡的凋亡率显著增加(P<0.05),试验组早期凋亡的凋亡率均显著增加(P<0.05)。3)与对照组相比,试验组Bcl-2/Bax均显著增加(P<0.05);与1组相比,2组、3组和4组Bcl-2/Bax均显著增加(P<0.05),且2组显著高于3组、4组(P<0.05)。综合得出,Gly-Gln对H2O2引起山羊瘤胃上皮细胞早期凋亡具有一定的保护作用。
分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-11-25 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 目的:本文旨在探讨糖酵解酶丙酮酸激酶M2型(PKM2)对人白血病细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:将靶向PKM2的慢病毒载体转染人K562细胞株(shPKM2组),同时设立空载体转染组为对照(Vector组)。采用qRT-PCR和Western blot技术分别检测Vector组和shPKM2组PKM2 mRNA和蛋白的表达以及自噬标志物的变化;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平。结果:在稳定干扰PKM2后,PKM2的mRNA(t=11.58,P=0.0003)和蛋白水平(t=11.88,P=0.0003)均明显降低。与Vector组比较,shPKM2组细胞体外增殖能力显著降低(F=118.87,P<0.0001)。同时,干扰PKM2可使K562细胞周期阻滞在G1期,细胞凋亡率显著增加(t=37.23,P<0.0001);使促凋亡蛋白Bax表达增加(t=15.36,P=0.0001)、抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(t=9.965,P=0.0006)。此外,干扰PKM2可减弱K562细胞自噬水平,表现为LC3II降低(tLC3II=10.32,PLC3II=0.0005),而p62水平增加(tp62=14.59,Pp62=0.0001)。还发现自噬诱导剂能逆转shPKM2引起的白血病细胞体外增殖能力减弱(F=96.32,P<0.0001)。结论:以上结果表明干扰PKM2可抑制人白血病K562细胞的体外增殖并促进其凋亡,其机制可能与PKM2介导的自噬活性降低有关,提示PKM2可能作为白血病诊疗的一个潜在靶点。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 探讨石蒜碱对肾癌细胞ACHN的作用及可能机制。方法 流式细胞仪分析石蒜碱对ACHN细胞周期及凋亡的影响;MTS检测石蒜碱对ACHN细胞增殖的作用;划痕实验、Transwell实验检测石蒜碱对ACHN细胞迁移、侵袭能力的影响;平板克隆形成检测石蒜碱对ACHN细胞集落形成能力的影响;qRT-PCR分析基因转录的变化;Western blotting分析蛋白表达水平的变化。结果 石蒜碱对 ACHN半数抑制浓度为 24.34 μmol/L。石蒜碱能将肾癌 ACHN细胞剂量依赖性阻滞于 G0/G1期(P<0.01);与正常对照组相比,5 μmol/L石蒜碱即能诱导ACHN细胞凋亡(P<0.01)、抑制ACHN细胞增殖(P<0.01);处理后ACHN细胞迁移能力(P<0.01)、侵袭能力(P<0.01)显著下降、集落形成能力亦呈剂量依赖性降低。qRT-PCR及 Western blotting显示 5 μmol/L的石蒜碱即能在基因及蛋白水平上调CDK4、Bax表达,而下调CyclinD1、Bcl-2、Survivin的表达;caspase-3基因表达增加,caspase-3蛋白水平变化却不甚明显。结论 石蒜碱对肾癌ACHN细胞具有明显的抗肿瘤效应,该药可为肾癌的治疗提供新思路。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《分子影像学杂志》
摘要: 目的 探讨CNE1对人鼻咽癌细胞系CNE1凋亡的影响。方法 利用阳离子脂质体Lipofectamine TM2000将HIF-1αsi RNA转染入CNE13细胞中。WB法测定CNE1细胞内HIF-1α的表达。流式细胞仪及Hochest荧光染色测定细胞凋亡率的变化。WB 法测定 CNE1 细胞内 BCL-2 的表达。结果 干扰 HIF-1α能有效地促进 CNE1 细胞的凋亡,同时可下调 BCL-2 的表达。 结论 体外实验初步证明HIF-1α基因在人鼻咽癌细胞系CNE1凋亡方面扮演重要角色,可通过下调BCL-2的表达来诱导凋亡。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 研究远华蟾蜍精对结直肠癌(CRC)细胞活力及凋亡的作用,并分析其抑制细胞活力及诱导细胞凋亡的机制。方法四甲基偶氮唑盐法检测远华蟾蜍精对CRC细胞活力的影响,细胞核荧光染色及流式细胞术检测TBG对肿瘤细胞凋亡的作用;免疫荧光检测线粒体膜电位及细胞内ROS水平,Western blotting及应激与凋亡信号抗体芯片检测TBG作用于肿瘤细胞后凋亡相关蛋白表达变化。结果 TBG以浓度和时间依赖关系显著抑制HCT116、SW480的细胞活力;TBG诱导HCT116细胞发生核固缩,形成凋亡小体,增加Annexin V阳性细胞率;TGB上调细胞p53基因和Bax蛋白表达,促进Caspase9和PARP发生片段化;抗体芯片发现该药诱导肿瘤细胞中 Bad磷酸化和 PARP片段化,抑制了 IΚBα、TAK1蛋白磷酸化和 Survivin蛋白表达。结论TBG通过诱导细胞凋亡而显著抑制CRC细胞活力,其凋亡诱导作用可能与p53介导的Bax通路活化及IAP通路的阻断相关。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 观察甲状旁腺激素的非依赖PLC的PKC转导通路(PTH/nonPLC/PKC)是否会对成骨细胞(MC3T3-E1)的凋亡以及细胞数量具有影响。方法 培养MC3T3-E1细胞,以1.5×104密度接种到96孔板,然后置于培养箱培养3 d直到细胞达到汇合状态,随机分为5组:按 100 nmol/L[Gly1, Arg19]hPTH(1-28);100 nmol/L[Gly1, Arg19]hPTH(1-34);100 nmol/L[Gly1, Arg19]hPTH(1-34)+1 μmol/L Go6983,1 μmol/L Go6983;空白对照组加入等体积的去离子水,分别刺激细胞1、24、48 h,然后使用细胞计数试剂盒(CCK-8)和Caspase-Glo® 3/7试剂盒(caspase-3)检测细胞的细胞数量与凋亡。结果 CCK-8检测结果显示,[Gly1, Arg19]hPTH(1-34)组与[Gly1, Arg19]hPTH(1-34)+Go6983组相比,在1 h和24 h具有提高细胞数量的趋势,但结果并没有统计学差异,48 h[Gly1, Arg19]hPTH(1-34)组与[Gly1, Arg19]hPTH(1-28)组相比,可以明显提高细胞的数量(P<0.05)。进一步的研究发现在[Gly1, Arg19]hPTH(1-34)组添加抑制剂Go6983后,细胞数量增多的效应消失(P<0.05)。Caspase-3检测凋亡结果显示,[Gly1,Arg19]hPTH(1-34)组与[Gly1, Arg19]hPTH(1-34)+Go6983组相比,在1 h和24 h具有抑制细胞凋亡(细胞凋亡受到抑制),但是差异无统计学意义。48 h检测细胞凋亡显示,[Gly1, Arg19]hPTH(1-34)组与[Gly1, Arg19]hPTH(1-28)组相比,前者可以明显抑制细胞凋亡(P<0.05),给予PKC抑制剂Go6983后,其抑制凋亡现象消失。结论 PTH的nonPLC/PKC信号转导通路可能在长时间(48 h)作用于MC3T3-E1细胞时,可抑制细胞凋亡,提高细胞的数量。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 利用TALEN技术敲除人胃癌细胞系MGC803细胞株MYH9基因,观察MYH9基因沉默后细胞周期及凋亡改变。方法 根据斯丹赛FastTALE TM TALEN试剂盒说明书,设计并构建靶向MYH9基因的TALEN质粒对。通过质粒转染、DNA测序、RT-PCR和Western blot等检测质粒活性,成功挑取MYH9基因敲低单克隆株,并对构建好的细胞株进行周期和凋亡检测。结果 成功挑选的MGC803单克隆细胞株未检测到MYH9基因完全敲除;MYH9基因敲低后,MGC803细胞周期受阻于G2/M期(P<0.05),早期凋亡增加(P<0.05)。结论 利用TALEN技术成功构建MGC803细胞MYH9基因敲低单克隆株,该模型有助于后期深入探讨胃癌MYH9基因功能。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的研究17-AAG联合紫杉醇(PTx)对食管癌细胞Eca-109增殖和凋亡的影响。方法予以PTX和17-AAG单独或联合使用作用于Eca-109细胞株,采用MTT法检测其细胞增殖的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡的变化。结果与对照组相比,单独使用17-AAG ,PTX均能够抑制Eca-109细胞的增殖;0.5μmol/L PTX联合0.625μmol/L 17-AAG可抑制Eca-109的生长,且联合效应明显强于各自单药组(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示:17-AAG将Eca-109细胞阻滞于G2/M期,PTX将Eca-109细胞阻滞于S期。17-AAG与PTX联合用药使Eca-109细胞阻滞于G2/M期和S。17-AAG组、PTX组及联合组作用Eca-109细胞株24 h后其凋亡率分别为4.52% ,10.91 % ,29.88%,显著高于对照组(1.32% );联合用药后,可形成明显凋亡峰,明显高于单药组。结论PTX和17-AAG均可抑制食管癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,两者联合可增强上述作用。
分类: 医学、药学 >> 预防医学与公共卫生学 提交时间: 2023-12-11 合作期刊: 《中国全科医学》
摘要: 心迷走神经作为心脏自主神经系统重要的神经,对于慢性心力衰竭的治疗有着重要的作用。近年来,多个研究发现迷走神经刺激通过减少炎性因子及相关蛋白的表达、凋亡相关蛋白的表达,改善心肌功能及心室重塑等,从而对心脏功能进行保护,延缓慢性心力衰竭的进展。然而,关于迷走神经在慢性心力衰竭炎症及凋亡机制的相关报道较少,因此本文综述了心迷走神经的解剖、治疗的可能机制、迷走神经刺激实用参数以及近年来有关迷走神经刺激在慢性心力衰竭炎症和凋亡机制中的应用和最新临床进展,为后续相关研究开展提供借鉴。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 探讨龙葵素对前列腺癌细胞 Du145裸鼠移植瘤生长的影响及分子机制。 方法 采用高度恶性的转移前列腺癌细胞株 Du145作为动物体内实验的模型,裸鼠皮下接种 Du145细胞建立裸鼠皮下瘤模型。1周后将接种的裸鼠随机分为 2组:龙葵素实验组和生理盐水空白对照组,每 3 d分别向实体瘤中间部位注射 0.2 mL龙葵素(50 μg/mL)和生理盐水,观察裸鼠体内肿瘤生长,3周后颈椎脱臼处死裸鼠,剥离肿瘤组织,测量肿瘤的重量并根据肿瘤重量计算抑瘤率。实时荧光定量PCR和 Western blotting技术检测各组裸鼠瘤体细胞周期相关基因 mRNA和蛋白表达。Tunel原位检测各组裸鼠瘤体组织凋亡情况。结果 龙葵素治疗组裸鼠肿瘤成瘤率明显下降,裸鼠瘤体生长速度明显低于对照组(P<0.01)。龙葵素能抑制瘤体细胞 CyclinD1、CyclinE1、CDK2、CDK4和 CDK6基因 mRNA和蛋白的表达,显著升高 p21基因 mRNA和蛋白的表达,龙葵素干预后裸鼠瘤体组织凋亡显著增加(P<0.01)。结论 龙葵素可通过调控细胞周期 G1/S关卡促进组织细胞凋亡抑制前列腺癌细胞裸鼠移植瘤生长。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的为研究人肝癌细胞系HepG2线粒体DNA ( mtDNA)缺失后的放射生物学特性,建立并鉴定mtDNA缺失HepG2(p0HepG2)细胞系。测定辐射干预下mtDNA缺失(CRh00)肝癌细胞的凋亡情况、侵袭能力以及辐射敏感性的变化。方法在含有嗅化乙锭(EB)、丙酮酸、尿嚓陡的特殊培养基中培养HepG2细胞,经30次传代后,有限稀释法筛选完全去除mtDNA的克隆。去除丙酮酸及尿嚓陡后,观察细胞的存活情况。PCR法鉴定mtDNA的缺失。用6MvX射线梯度剂量照射HepG2细胞和p0HepG2细胞,平板克隆法绘制生长曲线,线性二次方程拟合生存曲线,计算α/β。2Gy剂量辐射细胞,24 h后用Hochest33342细胞核染色,比较HepG2细胞与p0HepG2凋亡率的差异。用Transwell法测定两种不同细胞的侵袭能力。结果在含EB特殊培养环境下,HepG2细胞可持续生长传代至30代,去除丙酮酸和尿嚓陡后,细胞短时间内大量死亡。经PCR法证实mtDNA完全缺失。p0HepG2细胞a/p显著低于正常HepG2细胞,辐射抵抗能力增强。辐射干预后p0HepG2的凋亡比例显著减少。p0HepG2穿膜细胞数显著增多。结论在EB长期诱导下,HepG2肝癌细胞可被成功诱导为mtDNA缺失细胞。p0HepG2细胞的辐射抵抗性显著增强,抗凋亡能力及侵袭能力均提高。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的构建人VHL重组慢病毒表达载体及干扰载体,建立稳定转染细胞株,观察VHL对肾癌细胞株增殖和凋亡的影响方法构建pZsGreenl-VHL及pLL3.7-shVHL重组慢病毒载体,与3质粒包装系统用脂质体法共同转染293T细胞,包装成病毒颗粒,分别感染A498,Caki-1细胞,并进行RT-PCR和Western blot检验细胞中VHL的表达。用MTS法和流式细胞仪检测VHL对肾癌细胞增殖和凋亡效应的影响。结果重组慢病毒载体及稳定转染细胞株构建成功,转染后VHL在细胞中表达明显变化;VHL过表达细胞的增殖速度明显低于各对照组,而凋亡率明显高于各对照组;VHL干扰细胞的增殖速度明显高于各对照组,而凋亡率明显低于各对照组(P<0.05 )。结论VHL对肾癌细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的观察丙戊酸钠对阿霉素体外抗乳腺癌Hs578T细胞作用的影响。方法Western blot检测缝隙连接蛋白Cx43的表达;MTT法检测阿霉素的细胞毒性;Annexin V/PI双染法观察阿霉素对细胞早期凋亡的影响;Hochest 33258荧光染色法检测阿霉素对细胞晚期凋亡的影响。结果Western blot结果显示丙戊酸钠可以显著增强缝隙连接蛋白Cx43的表达(P<0.01) ; MTT结果表明在细胞间缝隙连接功能形成的条件下,丙戊酸钠联用阿霉素组的细胞存活率显著低于阿霉素组(P<0.01) ; Annexin V/PI双染法显示丙戊酸钠联用阿霉素组的细胞早期凋亡率显著高于阿霉素组(P<0.01) ; Hochest 33258荧光染色结果显示丙戊酸钠联用阿霉素组的细胞晚期凋亡率显著高于单用阿霉素组(P<0.01)。结论丙戊酸钠可显著增强阿霉素的细胞毒性及其诱导的细胞凋亡作用,其机制可能与增强缝隙连接通讯功能有关。
分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2017-10-23 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要: 热应激是一种常见的非特异性应激,给畜牧业带来较大的损失。肠道组织在热应激作用下易发生缺血缺氧,肠道细胞产生氧化应激,造成细胞凋亡,引起肠道组织损伤。而肠道作为动物机体吸收营养、屏障病原体最为重要的器官,当其受到损伤时将直接影响到动物机体的生长发育及健康状况。本文从热应激诱导肠道细胞产生氧化应激,氧化应激对肠道的损伤,以及热应激诱导细胞凋亡途径等方面,结合国内外近年来研究进展作一综述。
分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要: 本试验旨在研究饲料中添加酵母水解物对大口黑鲈生长性能、血浆生化指标以及肝脏组织健康的影响。试验将160尾初始体重为(28.50±0.01) g的大口黑鲈随机分为2组,分别饲喂在基础饲料中添加0(YH0组,作为对照组)和5 g/kg(YH5组)酵母水解物的饲料。每组设置4个重复,每个重复20尾鱼,养殖周期为10周。结果显示:饲料中添加5 g/kg的酵母水解物能显著提高大口黑鲈的蛋白质沉积率(P0.05)。YH5组血浆中碱性磷酸酶(AKP)活性显著高于YH0组(P0.05)。针对大口黑鲈肝脏炎症和凋亡因子相关基因相对表达量的分析表明,YH5组肝脏中转化生长因子-β1(TGF-β1)基因的相对表达量较YH0组有下调的趋势(P>0.05),肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和半胱天冬酶(caspase)家族基因的相对表达量各组间没有显著差异(P>0.05)。在YH0组鱼体肝脏组织发现脂肪浸润以及纤维化表型,在纤维化组织中显示较多的激活态半胱天冬酶3信号,说明该表型下细胞凋亡严重程度高于脂肪肝和正常肝脏,YH5组鱼体肝脏组织未见纤维化表型。由此表明,饲料中添加5 g/kg的酵母水解物可促进大口黑鲈鱼体蛋白质沉积,降低肝脏细胞纤维化的风险。
分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要: 本研究以IPEC-J2细胞为材料,研究不同浓度和时间处理下呕吐毒素(DON)对猪空肠上皮细胞凋亡的影响。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖毒性,筛选出合适的DON作用时间(6、12、24 h)。通过低浓度(200 ng/mL)和高浓度(2 000 ng/mL)DON分别作用IPEC-J2细胞6、12、24 h,检测DON对细胞有丝分裂周期和细胞早期凋亡的影响。结果表明:1)DON对IPEC-J2细胞生长有明显抑制作用,200和2 000 ng/mL DON浓度下,48和72 h的细胞存活率显著低于24 h(P<0.05);2 000 ng/mL DON浓度下,72 h的细胞存活率显著低于48 h(P<0.05)。2)不同DON浓度对细胞周期影响不同,低浓度DON主要作用于细胞有丝分裂S期,干扰DNA的复制;而高浓度DON主要作用于细胞有丝分裂G2/M期,干扰有关酶与纺锤丝蛋白质的合成。3)DON作用6 h,低浓度DON组和高浓度DON组早期凋亡率和总凋亡率显著高于对照组(P<0.05);DON作用12 h,高浓度DON组早期凋亡率和总凋亡率显著高于对照组和低浓度DON组(P<0.05)。由此可见,DON抑制了IPEC-J2细胞增殖,低浓度DON使细胞有丝分裂停留在S期,高浓度DON使细胞有丝分裂停留在G2/M期。DON促使细胞早期凋亡,使总凋亡率上升,且促凋亡作用随DON浓度升高而增强
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 探讨多不饱和脂肪酸DHA对宫颈癌细胞(HeLa、Siha)凋亡、迁移侵袭的影响。方法 HeLa、Siha细胞,分为空白对照组、不同浓度DHA组,观察不同药物浓度作用于宫颈癌细胞后的形态学改变,Hoechst 33258染色检测48 h后细胞核凋亡情况;MTT法检测DHA作用于宫颈癌细胞24、48、72 h后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测不同浓度DHA作用于宫颈癌细胞48 h后的凋亡率;细胞划痕实验和 Transwell迁移实验检测不同浓度DHA对宫颈癌细胞体外迁移能力的影响;Western Blotting检测DHA刺激细胞 48 h后凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3)及肿瘤转移侵袭相关蛋白 MMP-9、VEGF表达情况。结果倒置显微镜下及经Hoechst33258染色后,随着DHA浓度增加,宫颈癌细胞形态改变越明显,凋亡小体增多;MTT结果显示DHA呈时间-浓度依赖性抑制宫颈癌细胞增殖,促进其凋亡;细胞划痕实验和transwell迁移实验提示DHA作用于细胞后,浓度越高,对细胞的体外迁移能力的抑制作用越强;Western Blotting显示 DHA作用于细胞 48 h后,cleaved-caspase3、Bax蛋白表达增加(P<0.05),而 Bcl-2、MMP-9、VEGF 蛋 白 表 达 下 降(P<0.05),Bcl-2/Bax 比 值 下 降(P<0.05)。 结 论 DHA 可 通 过 调 控cleaved-caspase3、Bax及Bcl-2表达,促进宫颈癌细胞凋亡的作用并能通过降低MMP-9、VEGF的表达抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《分子影像学杂志》
摘要: 目的通过检测TLR4在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中表达变化,并与凋亡情况对比,研究TLR4在新生儿缺氧缺血性脑损伤发病机制中的作用,为临床的进一步研究提供客观的实验依据。方法选取80只7d龄新生健康大鼠,随机分为实验组和对照组各40只。TUNEL法检测脑组织细胞凋亡状况,免疫组化SP法检测TLR4表达变化。结果细胞凋亡缺氧缺血术后6h阳性率上升,至24 h达到高峰,72 h和7d表达下降。T1R4实验组于缺氧缺血6h即出现阳性表达,12h表达到峰值,24 h无明显变化,72 h和7d表达下降。实验组与对照组在各时间点比较差异均有统计学意义(p<0.05 ) } TLR4与细胞凋亡呈正相关(X0.452 )。结论新生大鼠缺氧缺血性脑损伤组织中TLR4高表达,可能促进细胞凋亡发生,在脑损害的形成过程中起到了重要的作用。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 研究STOML-2过表达抑制人宫颈鳞癌Siha细胞凋亡的机制,以期为宫颈癌的治疗开辟新的路径。方法 用携带STOML-2基因的腺病毒感染Siha细胞作为过表达组,同时设立空白载体组及空白组作为对照,72 h后用Western blot检测STOML-2的过表达,并用MTT法检测STOML-2过表达对细胞增殖的影响。用IC50 的顺铂处理各组细胞24 h后,利用荧光显微镜观察STOML-2过表达对细胞凋亡的影响,并利用流式细胞仪进一步分析细胞的凋亡率;采用Western blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白caspase3、cleaved-caspase3、Bcl-2、Bax以及线粒体内外细胞色素C(Cyt C)表达量的变化。结果 与空白组及空白载体组相比,Western blot结果显示过表达组STOML-2的表达量明显增加;MTT结果显示,STOML-2过表达后可明显促进Siha细胞的增殖。用IC 50 的顺铂处理细胞24 h后,荧光显微镜下,空白载体组凋亡细胞的细胞核大小不一,浓染致密的蓝色荧光显示核固缩,部分核裂解为凋亡小体,而过表达组细胞核多较完整,着色较浅,染色质密度均匀一致,并且流式细胞仪结果同样提示STOML-2过表达后细胞凋亡率明显降低。Western blot结果显示过表达组线粒体凋亡途径相关蛋白cleaved-caspase3、Bax以及线粒体外Cyt C表达水平降低,而caspase3、Bcl-2及线粒体内Cyt C的表达水平则相应升高。结论 STOML-2过表达可以促进Siha细胞增殖,其抑制凋亡的机制可能与线粒体凋亡途径相关。