分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-07-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：探讨S100A9在乙型肝炎病毒X（HBx）介导的HepG2细胞增殖及迁移中的作用。方法：用表达HBx蛋白的重组腺病毒AdHBx感染HepG2细胞后，用CCK-8实验检测细胞增殖能力及划痕愈合实验检测细胞迁移能力；在HepG2/AdHBx细胞中转染S100A9-siRNA及其对照siRNA后，检测HepG2细胞增殖及迁移能力；在HepG2/AdHBx和对照组HepG2/AdGFP细胞中，采用Real- time PCR及Western Blot检测S100A9基因及蛋白的表达情况；在HepG2/AdHBx细胞中，加入不同剂量的NF-κB抑制剂BAY11-7082后，检测各组中S100A9的基因及蛋白表达情况。结果：HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移；S100A9-siRNA抑制S100A9的表达后，HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移的作用降低，HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移部分依赖于S100A9；S100A9基因及蛋白表达在HepG2/AdHBx中较对照组HepG2/AdGFP显著升高，HBx可致S100A9表达增加；抑制NF-κB转录活性后，AdHBx+BAY11-7082组S100A9基因及蛋白表达较对照组显著降低，阻断NF-κB转录活性可部分抑制HBx调控的S100A9表达。结论：HBx可调控S100A9的表达且与NF-κB活化有关， S100A9参与 HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-07-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：为了制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法：提取小鼠胚胎脑组织总RNA，设计引物，通过RT -PCR方法获取Ucp2基因片段，将其克隆到pGEM -T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物，PCR扩增获得转录模板，通过Sp6及T7 RNA聚合酶，获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后，通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果：成功获得Ucp2基因正义、反义探针，反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达，而正义探针未能检测到表达信号。结论：成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA 原位杂交探针，为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达，尤其在神经组织的定位奠定基础。
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