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Your conditions: 王 芳(1)

1. chinaXiv:201801.00609 [pdf]

sh1}NA-PAX6慢病毒载体构建及其对胶质瘤U251细胞增殖的影响

廖晓红; 尹蔚兰; 王 芳; 邬力祥; 黄柏胜
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 构建shRNA-PAX6慢病毒载体并观察其对胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法 根据文献报道的PAX6靶点序列, 设计两条PAX6基因的siRNA靶点干扰序列,引物退火形成带粘性末端的双链,与经BamH I、EcoR I双酶切后线性化的慢病毒 载体进行连接、转化,构建shRNA-PAX6慢病毒重组载体,再经菌落PCR及测序鉴定重组载体; 在293T细胞中包装病毒,将包装 后的shRNA-PAX6慢病毒重组载体感染U251细胞。Real-time PCR检测PAX6 mRNA的表达水平,Western blot检测PAX6蛋 白的表达,MTT法检测U251细胞增殖。结果 慢病毒载体pLKD-CMV-G&NR-U6-shRNA经双酶切后可见线性化的8208 bp大 片段,菌落PCR及测序鉴定证实shRNA-PAX6慢病毒重组载体构建成功,构建的shRNA-PAX6慢病毒载体在293T细胞完成包 装,测得慢病毒滴度为6.73×108 TU/mL;Real-time PCR结果显示,沉默PAX6的表达可见U251细胞PAX6 mRNA表达水平明显 低于正常对照组及慢病毒空载体组(P<0.05);Western blot结果显示,PAX6蛋白表达亦明显低于正常对照组及慢病毒空载体组 (P<0.05);MTT结果显示,与正常对照组及慢病毒空载体组细胞比较,感染shRNA-PAX6慢病毒重组载体组的细胞,细胞增殖 能力明显增强(P<0.05)。结论 成功构建人PAX6基因的shRNA-PAX6慢病毒重组载体,沉默PAX6基因的表达, U251细胞的 增殖能力增强。

submitted time 2018-01-25 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits691Downloads367 Comment 0

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