分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 从烟台海滨水域分离出一株海洋单细胞微藻。通过形态学鉴定和18S rDNA基因序列分析确定该株真核微藻属于四爿藻属(Tetraselmis sp.),命名为138号藻种。利用Central Composite法的Box-Behnken实验设计优化了此藻株的原生质体备条件。获得了以原生质体制备率为目标函数的三元二次回归方程:Y1=88.30-0.19X1+2.44X2+2.28X3-0.95X1X2-3.13X1X3+3.78X2X3-9.85X12-7.95X22-7.22X32。得到最优制备条件:混合酶比例纤维素酶:果胶酶为5:2;混合酶浓度为4.5%(纤维素酶浓度为2.7%,果胶酶浓度为1.8%),;缓冲液pH为6.4,最高理论制备率81.5%。经过3次平行试验,实际得到的原生质体制备率为80.5%,与模型预测值的误差为1.24%。绿色荧光蛋白报告基因瞬时表达检测了所制备原生质体的转化能力。