99Tcm标记反义miR208b 寡核苷酸及其转染离体肥大心肌细胞的实验研究

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》

王静 冯会娟 欧阳伟 孙云钢 吴菊清 陈盼

摘要： 目的 探索用放射性核素99Tcm标记反义miR208b寡核苷酸，并转染离体早期肥大心肌细胞的实验过程及方法。方法 合成针对miR208b 的反义miR寡核苷酸（AMO），LNA（带锁核酸）修饰AMO，将双功能螯合剂NHS-MAG3（N-羟基琥珀酰亚胺-巯基乙酰基三甘氨酸）与LNA-AMO偶联后，用99Tcm标记，然后用Sep-Pak C18反相层析法对NHS-MAG3 -LNA- AMO及其标记物进行洗脱纯化，前者同时经Gene Quant DNA/RNA calculator测定在260 nm波长处的吸光度；不同检测方法测定纯化后标记物的标记率、放化纯度、稳定性以及与靶基因杂交的活性；建立由血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的离体心肌肥大细胞模型，检验早期肥大心肌细胞内miRNA208b的相对表达量以及经脂质体包裹的99Tcm -NHS-MAG3-LNA- AMO在早期肥大心肌细胞内的滞留率。结果 纯化后的标记物标记率>84%，放化纯度>86%，标记物分别在新鲜人血清、生理盐水中孵育12 h后，放化纯度均大于80%，并具有与靶向基因杂合的能力。离体心肌肥大模型成功建立，测得早期心肌肥大细胞内miRNA208b表达升高，且最终标记物转染细胞后6 h滞留率大于20%。结论 在双功能螯合剂NHS-MAG3以及LNA的介导下，成功将放射性核素99Tcm标记于NHS-MAG3-LNA-AMO，最后将反义探针顺利转染早期离体肥大心肌细胞，这为后续的在体心肌肥大核素显像提供重要实验基础。

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