在肾脏高效导入miR-483-5p的方法

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2018-06-15 合作期刊: 《南方医科大学学报》

夏颖 周雪娟 古文清 赵岩岩 肖潇 白晓春 刘俊 李明

摘要： 目的:研究在肾脏高效导入目的基因miR-483-5p的方法。方法肾皮质注射miR-483-5p慢病毒：取35只C57BL/6J小鼠，随机分为空白对照组、慢病毒低剂量组（每侧肾皮质注射5 μL慢病毒）和慢病毒高剂量组（每侧肾皮质注射20 μL慢病毒），注射后7 d和21 d处死取材；构建可诱导全身过表达miR-483-5p的转基因小鼠；利用cre-loxp系统构建肾小管特异过表达miR-483-5p的转基因小鼠。3种模型小鼠利用全自动生化分析仪检测血清中尿素氮（BUN）水平判断肾功能，组织切片HE 染色观察肾脏组织结构，TUNEL法检测肾脏细胞凋亡。Real-time qPCR 检测miR-483-5p在肾脏的表达。结果3种过表达miR-483-5p小鼠肾功能均正常，肾脏组织结构无明显变化，肾脏细胞无凋亡。肾皮质注射20 μL LV3-miR-483-5p 后21 d表达最高（1.2±0.43 vs 8.6±1.09，P<0.001）。可诱导全身过表达miR-483-5p 的转基因动物在肾脏表达效率较低（0.9±0.09 vs 1.7±0.19，P<0.05），Creloxp 转基因小鼠可实现在肾脏特异性表达，且效率较高（1.6±1.13 vs 12.36±3.89，P<0.05）。结论首次构建肾小管特异过表达miR-483-5p的转基因小鼠模型，实现在肾小管特异高效表达，且不影响肾脏结构及功能，可以作为研究miR-483-5p在肾脏中的作用及其机制的良好模型；C57BL/6J小鼠每侧肾皮质注射20 μL LV3-miR-483-5p 后21 d过表达miR-483-5p效率较高，不影响肾功能，对肾组织无损伤，且模型构建时间较短，为miR-483-5p在肾脏中的作用及其机制研究提供良好的实验模型。

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