基于噬菌体展示技术抗黄曲霉毒素B1单链抗体的筛选及其蛋白结构分析

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

庞倩 陈晶 王小红 王佳

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）是一种毒性强、污染广的真菌毒素，建立高效、准确、快速的AFB1检测方法具有重要意义。利用噬菌粒-辅助噬菌体展示系统构建单链抗体(single chain variable fragment，scFv)文库，应用“淘选-洗脱”的策略，是筛选高亲和配体的常用方法之一。同时结合同源建模和分子对接等计算机辅助手段，分析得到抗体与抗原的结合位点与关键氨基酸，为在基因水平改造抗体提供基础。本研究从AFB1-BSA免疫小鼠的脾细胞内扩增重链可变区和轻链可变区，将组合成的scFv片段插入噬菌粒pCANTAB5e中，构建了噬菌体展示单链抗体文库，以不同浓度的AFB1-OVA作为抗原，从文库中筛选到一株亲和力较好的抗AFB1单链抗体scFv，其亲和常数为8×105 L/mol；根据同源建模和分子对接发现，与抗原AFB1结合时，scFv中Tyr33、Ser52和Tyr102起关键作用，分别以π-π共轭键、氢键和范德华力与AFB1结合。

 点击量 3013  下载量 1629  评论