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1. chinaXiv:201812.00642 [pdf]

BMP7基因沉默抑制钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化

程瑜; 施琼; 安利钦; 范梦恬; 皇改改; 翁亚光
Subjects: Biology >> Bioengineering

目的:探究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)基因沉默对钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的干预及治疗提供理论依据。 方法:非CAVD瓣膜组织(non-CAVD组)取自手术治疗的主动脉夹层患者,CAVD瓣膜组织(CAVD组)取自因钙化性主动脉瓣狭窄而进行主动脉瓣膜置换术的患者,采用免疫组化和Western blot法检测non-CAVD组和CAVD组中BMP7、Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白表达水平。选取健康家猪处死后即刻于无菌条件下取主动脉瓣叶,采用胶原酶连续消化法分离主动脉瓣膜间质细胞,观察其形态特征,并用免疫荧光染色行表型鉴定。采用脂质体转染法将BMP7-siRNA转染猪主动脉瓣膜间质细胞,采用qPCR和Western blot法验证BMP7表达的变化;利用钙盐培养基诱导细胞成骨分化,建立体外主动脉瓣膜间质细胞钙化模型后,采用ALP染色和茜素红S染色实验分别检测细胞早期及晚期成骨分化能力;采用qPCR和Western blot法分别检测细胞成骨相关基因及蛋白Runx2、OCN和OPN的表达情况。并用Western blot法检测BMP7下游信号通路中Smad1/5/8的磷酸化水平。结果:BMP7和Runx2蛋白在CAVD组中表达明显高于non-CAVD组。成功分离出原代猪主动脉瓣膜间质细胞,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(vimentin)染色阳性,血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)染色阴性。转染BMP7-siRNA后猪主动脉瓣膜间质细胞中BMP7的mRNA和蛋白水平均明显下调,早期及晚期成骨分化能力均明显降低。沉默BMP7基因的表达,可下调Runx2、OCN和OPN的基因及蛋白表达,且磷酸化的Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白水平明显降低。结论:BMP7基因沉默抑制钙盐诱导的主动脉瓣膜间质细胞的成骨分化能力,BMP7/Smads信号通路可能在该过程中发挥重要作用。

submitted time 2018-12-25 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits24409Downloads1632 Comment 0

2. chinaXiv:201811.00118 [pdf]

干扰PKM2对人白血病细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制

汪路; 杨丽媛; 唐雨婷; 陶瑶; 雷力; 敬一佩; 蒋雪坷; 张伶
Subjects: Biology >> Bioengineering

目的:本文旨在探讨糖酵解酶丙酮酸激酶M2型(PKM2)对人白血病细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:将靶向PKM2的慢病毒载体转染人K562细胞株(shPKM2组),同时设立空载体转染组为对照(Vector组)。采用qRT-PCR和Western blot技术分别检测Vector组和shPKM2组PKM2 mRNA和蛋白的表达以及自噬标志物的变化;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平。结果:在稳定干扰PKM2后,PKM2的mRNA(t=11.58,P=0.0003)和蛋白水平(t=11.88,P=0.0003)均明显降低。与Vector组比较,shPKM2组细胞体外增殖能力显著降低(F=118.87,P<0.0001)。同时,干扰PKM2可使K562细胞周期阻滞在G1期,细胞凋亡率显著增加(t=37.23,P<0.0001);使促凋亡蛋白Bax表达增加(t=15.36,P=0.0001)、抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(t=9.965,P=0.0006)。此外,干扰PKM2可减弱K562细胞自噬水平,表现为LC3II降低(tLC3II=10.32,PLC3II=0.0005),而p62水平增加(tp62=14.59,Pp62=0.0001)。还发现自噬诱导剂能逆转shPKM2引起的白血病细胞体外增殖能力减弱(F=96.32,P<0.0001)。结论:以上结果表明干扰PKM2可抑制人白血病K562细胞的体外增殖并促进其凋亡,其机制可能与PKM2介导的自噬活性降低有关,提示PKM2可能作为白血病诊疗的一个潜在靶点。

submitted time 2018-11-25 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits2545Downloads820 Comment 0

3. chinaXiv:201810.00270 [pdf]

S100A6通过巨噬细胞促结直肠癌细胞增殖的作用及机制

陈露; 黄茂; 彭棋; 赵佳丽; 谢佳卿; 林璐; 户丽君; 黄逸云; 胡琴; 周兰
Subjects: Biology >> Bioengineering

目的:探讨微环境中钙周期素S100A6 是否通过影响巨噬细胞(macrophages, Mφ)进而促进结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞的增殖及其机制。方法:制备(原核表达)并鉴定带GST(glutathione S-transferase,谷胱甘肽S-转移酶)标签的人重组S100A6蛋白(recombinant?GST-hS100A6,rS100A6) 和对照蛋白GST;采用台盼兰计数、CCK8和结晶紫染色检测CRC细胞系HCT116的增殖能力;用定量实时聚合酶链反应检测Mφ中IL-6 mRNA水平;用Western blot检测Mφ中IL-6的蛋白水平、HCT116细胞中JAK2和STAT3及其磷酸化水平。 结果:(1)成功制备rS100A6和GST蛋白。(2)与经rS100A6处理的Mφ(即A6-Mφ)共培养后,HCT116细胞的增殖能力增强(P<0.05);同时,HCT116细胞中的JAK2和STAT3水平无明显变化,但其磷酸化水平提高(P<0.05)。(3)A6-Mφ中,IL-6的mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05)。(4)在HCT116与A6-Mφ的共培养体系中加入IL-6R封闭肽后,A6-Mφ促HCT116细胞的活力和增殖能力的作用被部分逆转(P<0.05)。 结论:微环境中的S100A6可通过上调巨噬细胞中IL-6的表达、进而激活HCT116细胞中IL-6/JAK2/STAT3信号通路来促进CRC细胞的增殖。

submitted time 2018-10-26 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits1978Downloads644 Comment 0

4. chinaXiv:201810.00106 [pdf]

长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖, 迁移与侵袭的影响

万群; 刘梦瑶; 夏菁; 苟理尧; 唐敏; 孙恃雷; 张彦
Subjects: Biology >> Bioengineering

目的:探讨长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖,迁移与侵袭的影响。方法:构建SNHG3过表达质粒,实验分别设置阴性对照组(pcDNA-3.1+)与SNHG3基因过表达组(pcDNA-3.1+/SNHG3)。将MCF-7细胞转染对照组质粒和SNHG3过表达质粒,采用实时定量PCR 方法检测 SNHG3 mRNA 转录水平,Western blot 检测MMP9及EMT相关蛋白水平;集落形成实验检测MCF-7细胞增殖能力;划痕愈合实验检测MCF-7细胞横向迁移能力; Transwell 小室实验检测MCF-7细胞纵向迁移能力及侵袭能力;结果:过表达SNHG3后,MCF-7细胞中SNHG3的mRNA水平显著增高(P<0.001);MCF-7细胞的体外增殖能力明显增加(P<0.01),迁移(P<0.01)与侵袭能力(P<0.001)也显著增强,实时定量PCR, Western blot 结果显示SNHG3可激活EMT相关通路。结论: 过表达SNHG3可能通过激活EMT通路促进乳腺癌MCF-7细胞的增殖,迁移与侵袭。

submitted time 2018-10-15 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits2749Downloads855 Comment 0

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