分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-12-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的:研究白花地胆草（Elephantopus mollis H.B.K）的乙醇提取物EM-12抗肿瘤作用分子机制。方法:MTT检测EM-12对卵巢癌细胞活性影响；克隆形成抑制实验检测EM-12对卵巢癌细胞增殖能力的影响; GSEA（Gene set enrichment analysis）分析EM-12对卵巢癌2774-C10细胞的影响; PI单染检测细胞周期; Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡; Western blotting检测细胞凋亡、周期相关蛋白。结果:MTT实验结果表明，EM-12可以显著抑制卵巢癌细胞的活性；RNA-seq及GSEA分析表明EM-12诱导2774-C10发生G1/S期阻滞；克隆形成抑制实验结果表明,EM-12可以显著抑制卵巢癌细胞的增殖；流式细胞术结果表明随着药物浓度的增加,凋亡率逐渐增加,并且G1期细胞比例逐渐增加，S期细胞比例减少，发生G1/S期阻滞。Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加cyclin E2、Cyclin D1、CDK2、CDK6蛋白水平下降 ,并伴随caspase-8、Caspase-3活化及多聚ADP核糖聚合酶PARP酶切失活。 结论:EM-12诱导卵巢癌细胞发生G1/S期阻滞,且通过死亡受体通路诱导细胞凋亡。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的:探讨卤地菊Wedelia prostrate(Hook.et Arn.)Hemsl.的乙醇提取物W40单体对非小细胞肺癌GLC-82细胞的抗肿瘤作用分子机制。方法: 通过MTT和克隆形成抑制实验检测W40对非小细胞肺癌GLC-82细胞增殖的影响; 通过细胞划痕实验检测W40对细胞迁移的影响; 通过Annexin V-FITC /PI 双染法检测W40对细胞凋亡的诱导; 通过Western blotting分析细胞增殖和凋亡相关蛋白的水平。结果: MTT实验表明，W40对GLC-82细胞有较为明显的细胞毒作用；克隆形成抑制实验表明，W40可以显著抑制GLC-82细胞增殖, 且抑制程度呈现浓度依赖效应；细胞划痕实验表明，W40能够一定程度上抑制GLC-82细胞的迁移能力; Annexin V-FITC /PI 双染的结果显示，随着药物浓度的增加, 细胞凋亡率逐渐增加; Western blotting 结果表明,随着药物浓度的增加, p-Stat3蛋白的表达水平下降, Stat3下游蛋白Bcl-2、Mcl-1的表达减少。同时，促凋亡蛋白Bax的表达增多, 并伴随Caspase-9、Caspase-3 活化及多聚ADP- 核糖聚合酶PARP 酶切失活；p-BRAF蛋白的表达水平下降, p-BRAF下游蛋白p-MEK、p-ERK表达减少。结论: W40 通过抑制BRAF / MAPK / ERK 及Stat3信号通路来诱导细胞凋亡。
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