人白血病抑制因子在原核细胞中的表达与纯化

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

张鹤铭 蔡楚凡 刘杨 甘龙站 焦雪苗 田永强

摘要： 研究证明人白血病抑制因子（hLIF）是一种对多种不同类型的细胞和组织具有重要功能的细胞因子，其独特的生物学特性使其被广泛应用。本文介绍了自制的具有生物活性的hLIF，将hLIF基因克隆到pET32a中，并利用硫氧还蛋白（Trx）作为融合配体，在大肠杆菌中成功表达可溶性融合蛋白Trx-hLIF。亲和层析纯化后利用SDS-PAGE和Western blot对纯化结果进行检验。利用肠激酶（EK酶）切割融合蛋白，释放hLIF，随后通过简单的阳离子交换得到纯度高达98.1％的hLIF 4.75mg。小鼠M1髓系白血病细胞增殖分析测定纯化的rhLIF的功能与hLIF具有相似的生物活性，EC50为5ng/mL，对应的比活性为0.5×107 IU/mg。

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