分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-11-08 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在通过异源表达获得地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CP-16的脂类水解酶，并探究其在羽毛降解过程中的作用。试验以地衣芽孢杆菌CP-16基因组DNA为模板，扩增脂类水解酶基因，转化入大肠杆菌中表达，获得重组酶L-4。研究重组酶L-4的适宜pH、pH稳定性、适宜温度、温度稳定性以及有机溶剂和金属离子对其相对活性的影响，同时探究其对角蛋白酶K水解天然羽毛角蛋白的作用。结果显示，获得的脂类水解酶基因大小为747 bp，编码248个氨基酸，在大肠杆菌中成功表达出重组酶L-4，其分子质量约为28.3 ku，酯酶活性为0.42 U/mL，适宜pH为6.5，适宜温度为50 ℃；在pH 6.5~9.5条件下处理30 min相对活性保持80%以上，在低于50 ℃温度条件下处理30 min相对活性保持70%以上。二价铁离子（Fe2+）、钠离子（Na+）、锰离子（Mn2+）、钙离子（Ca2+）对重组酶L-4相对活性具有激发作用，钡离子（Ba2+）、锌离子（Zn2+）、铜离子（Cu2+）、镍离子（Ni2+）对重组酶L-4相对活性具有抑制作用。当有机溶剂浓度为30%时，重组酶L-4在二甲基亚砜（DMSO）和甲醇中保持97%和85%的相对活性，在丙酮、乙醇中保存45%以上的相对活性，在异丙醇中保存不到20%的相对活性，而在乙腈中相对活性基本完全丧失。用重组酶L-4预处理天然羽毛底物，可提高角蛋白酶K对底物的水解效率，促进率为4.32%。由此可见，脂类水解酶可降解羽毛表层脂质，可在促进角蛋白酶水解羽毛角蛋白中发挥作用。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在通过角质降解菌株X8P的种属鉴定、发酵条件优化和酶学性质研究，探讨降解植物表面角质层，进一步改善动物对植物纤维利用的可能新方案。试验通过形态观察和16S rDNA测序鉴定菌株X8P种属，并对其产酶所需碳源、氮源、发酵温度与时间进行优化，其发酵液经硫酸铵盐析沉淀获得其胞外蛋白粗酶，并对其粗酶催化的适宜pH和pH稳定性、温度和温度稳定性，以及有机溶剂、表面活性剂和金属离子对其活性的影响进行研究。结果表明：1）菌株X8P经形态观察和分子鉴定为东方醋杆菌（Acetobacter orientalis）。2）菌株X8P适宜产酶发酵条件为溶菌肉汤（LB）培养基中37 ℃发酵4 d，1%橄榄油和1%葡萄糖明显促进菌株产酶，而1%可溶性淀粉明显抑制菌株产酶。3）该菌株胞外粗酶催化适宜pH和温度分别为6.5和45 ℃，且表现出一定pH稳定性，但在有机溶剂中不稳定，仅甘油中可保留全部活性，在二甲基亚砜（50%）中活性可保留66%。吐温（Tween）-20（1 mmol/L）、Tween-80（1 mmol/L）和聚乙二醇辛基苯基醚（1和10 mmol/L）可使菌株X8P粗酶活性提高3%~35%。金属离子钾离子(K+)、锰离子（Mn2+）（1和10 mmol/L）可使菌株X8P粗酶活性提高2%~20%。由此可见，菌株X8P具有一定的产角质酶潜力和应用前景，可进一步深入研究。
点击量
点击量
下载量
评论
