鸡OV启动子表达HA对禽流感病毒攻击提供完全保护

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-04-19 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

李亚芳 赵颖慧 刘赛宝 王伟 曾为俊 王金泉 陈洪岩 孟庆文

摘要： 鸡卵清蛋白（Ovalbumin，OV）基因5’调控序列是构建鸡输卵管生物反应器的首选调控元件。以EGFP为报告基因，构建OV启动子真核表达载体，转染原代输卵管上皮细胞和CHO细胞，筛选得到1.1kb的高效OV启动子。构建1.1kb OV启动子表达H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白真核表达载体pOV1.1k-HA，转染CHO细胞。PCR、RT-PCR鉴定结果证明HA基因整合至CHO细胞基因组，并进行转录；SDS-PAGE、Western blot及HA试验结果证明HA蛋白在CHO细胞内的表达，并具有免疫反应性和血凝活性。以纯化的HA蛋白免疫4周龄SPF鸡，2周后加强免疫一次，加强免疫3周HI抗体水平为6.3log2；以106 EID50 H5N1(A/Goose/Guangdong/1/96)亚型禽流感病毒鼻腔接种SPF鸡，免疫组100%存活，无排毒现象，对照组100%死亡。结果表明：筛选的1.1kb OV启动子可有效驱动HA蛋白表达，表达的HA蛋白免疫SPF鸡对禽流感病毒攻击提供完全保护；为鸡输卵管生物反应器表达保护性抗原和珍贵药物蛋白奠定了基础。

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