利用CRISPR/Cas9技术构建AEG-1基因敲除U251细胞系并探讨其转移行为的特点

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-07-15 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

盛玉瑞 李斌 王斌 左娣 马琳 任晓璠 郭乐 刘昆梅

摘要： 星形胶质细胞上调基因-1（astrocyte elevated gene-1，AEG-1）在多种肿瘤中过表达，参与肿瘤的形成、转移等过程。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除AEG-1基因并研究其在胶质瘤细胞转移过程中的作用。首先设计构建sgRNA/Cas9二合一表达载体并转染到人胶质瘤U251细胞中，通过TA克隆测序鉴定sgRNA的活性；然后筛选建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系，并利用Western blot实验检测AEG-1的敲除效率；最后利用Transwell小室、划痕实验评价AEG-1敲除后对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果显示，成功构建靶向敲除AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体，所构建的载体与实验设计相一致，通过TA克隆测序鉴定sgRNA有活性；成功建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系，Western blot实验结果表明敲除效率高达98％；Transwell小室实验、划痕实验结果表明AEG-1敲除U251细胞系的转移能力明显降低。

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