家蝇抗菌肽AMPs17蛋白原核表达条件的优化及其抗真菌活性检测

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

杨隆兵 国果 马慧玲 李妍 赵欣宇 苏佩佩 张勇

摘要： 目的：优化AMPs17重组蛋白的原核表达条件，分析重组蛋白的抗真菌活性。方法：比较不同的诱导温度(25 ° C, 28 ° C, 30 ° C, 32 ° C, 34 ° C)、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度（0.025、 0.05、0.1、0.3、0.5、0.8、1.0mmol·L-1）和诱导时间（12h、15h、18h、21h、24h）对AMPs17重组蛋白表达量的影响，筛选AMPs17重组蛋白的最佳表达条件；采用镍离子金属螯合剂亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，SDS-PAGE电泳和ImageJ图像分析系统对表达结果进行分析，Western bolt对AMPs17重组蛋白鉴定，高效液相色谱分析重组蛋白的纯度，微量液体稀释法及菌落计数法检测其抗真菌活性。结果：在诱导温度为32℃、IPTG浓度为0.05mmol·L-1的条件下诱导培养15h，AMPs17重组蛋白的表达量最高且最为稳定；HPLC色谱仪分析显示AMPs17重组蛋白纯度可达到90％以上；优化后的AMPs17重组蛋白能有效抑制白色念珠菌的生长。结论：本研究优化了家蝇抗菌肽AMPs17的诱导表达条件，获得了高表达、稳定且具有抗真菌活性的蛋白，为后续抗菌机制及应用研究提供一定的实验基础。

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