分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-03-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 目的 制备特异性抗人表皮生长因子受体(EGFR)的单链抗体(scFv),鉴定其生物学活性,为进一步研究基于单链抗体的免疫治疗奠定基础。方法 从分泌抗人EGFR单克隆抗体的杂交瘤细胞系提取总RNA,利用5’RACE技术扩增轻链和重链可变区(VL、VH)基因,构建具有VL、VH基因的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中进行表达和鉴定。ELISA鉴定单链抗体对抗原的特异性;Fortebio检测抗原抗体间的亲和力,流式细胞术检测单链抗体结合肺癌细胞系天然EGFR的功能活性。结果 获得唯一的轻重链可变区序列VL、VH,成功构建EGFR-scFv,特异性与天然EGFR蛋白结合,亲和力达3.22×10-9mol/L。结论 成功构建了抗人EGFR单链抗体,为肺癌免疫导向治疗研究奠定了基础。