白菜型冬油菜‘陇油7 号’叶片响应低温胁迫的差异蛋白鉴定与分析

分类： 农、林、牧、渔 >> 农业基础学科 提交时间： 2017-11-09 合作期刊: 《中国生态农业学报》

陈 奇 袁金海 刘自刚 孙万仓 方 彦 赵新旺 马 骊 蒲媛媛 赵艳宁 曾秀存

摘要： 为了从蛋白质组学的角度探讨超强抗寒品种白菜型冬油菜‘陇油7 号’的抗寒机理, 本研究采用TCA(三氯乙酸)-丙酮沉淀法, 提取低温胁迫(4 ℃, 7 d)前后的叶片总蛋白, 对蛋白提取方法、IPG(固定 pH 梯度)胶条种类等环节进行了优化, 运用双向电泳和质谱分析技术, 鉴定了低温胁迫下‘陇油7 号’5 叶期叶片总蛋白质 组分的表达差异模式。结果表明: 改进后的蛋白质提取液(含DTT, 二硫苏糖醇)和PVPP(聚乙烯吡咯烷酮)得到的蛋白质平均浓度较改进前高3.42 μg·μL1, 除盐时间较改进前短1.14 h; 同时, 含蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)的蛋白提取液获得的蛋白质种类丰富, 凝胶图谱中可检测到661 个蛋白点, 较改进前可测蛋白点数(587)提高11.2。采用17 cm pH 4~7 的IPG 胶条的电泳能更好地分离蛋白, 得到重复性好、分辨率高的蛋白质组图谱。利用PDQuest 8.0 软件分析比较了超强抗寒品种‘陇油7 号’低温胁迫前后的蛋白组表达谱, 发现低温胁迫前后共有15 个质变的蛋白质点, 推测这些差异蛋白点可能与低温胁迫的响应有关。进一步对质变的蛋白质点进行了质谱分析, 鉴定出11 个与低温胁迫相关的蛋白质点, 这些蛋白包括光合作用相关的蛋白、糖代谢相关的蛋白、物质运输相关的蛋白和逆境响应相关的蛋白。而且, 低温胁迫处理前后, ‘陇油7 号’叶片蛋白质的表达水平存在明显差异, 这些差异蛋白可能在冬油菜抗寒响应中发挥重要作用。

 点击量 1679  下载量 1093  评论