分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 金黄色葡萄球菌是一类重要的病原菌，其毒力因子的表达及分泌过程由多种双组份信号转导系统（two component signal transduction system, TCSTS）共同调控，其中ArlRS双组份信号转导系统与细菌的生长和分裂密切相关。ArlRS双组份系统的信号传递通过组氨酸激酶ArlS磷酸化实现,ArlS的胞内域被认为是调控毒力因子表达的重要功能域, 本文以ArlS蛋白的胞内域部分即ArlSCA为目标蛋白进行相关的活性研究。首先构建pProEX-HTa-arls和pProEX-HTa-arlr重组质粒，对目的蛋白进行诱导表达。其次，利用金属离子螯合层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析方法对目的蛋白进行分离纯化，纯化后的ArlR蛋白纯度可达98%，产量约为25 mg/L；纯化后的ArlS蛋白纯度可达90%，产量约为15 mg/L。圆二色谱检测结果显示纯化后的目的蛋白有完整的二级结构具有激酶活性。体外磷酸化结果显示，ArlS蛋白自磷酸化后可以将磷酸基团转移给反应调控蛋白ArlR。最后，利用定点突变的方法，构建了418位和420位氨基酸残基突变的表达载体pProEX-HTa-ArlSCAG418A和pProEX-HTa-ArlSCAG420A。ArlSCAG418A和ArlSCAG420A蛋白不具有激酶活性，说明418位和420位氨基酸残基在ArlS蛋白的自磷酸过程中起着关键作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 金黄色葡萄球菌是一类重要的病原菌，其毒力因子的表达及分泌过程由多种双组份信号转导系统（two component signal transduction system, TCSTS）共同调控，其中ArlRS双组份信号转导系统与细菌的生长和分裂密切相关。ArlRS双组份系统的信号传递通过组氨酸激酶ArlS磷酸化实现,ArlS的胞内域被认为是调控毒力因子表达的重要功能域, 本文以ArlS蛋白的胞内域部分即ArlSCA为目标蛋白进行相关的活性研究。首先构建pProEX-HTa-arls和pProEX-HTa-arlr重组质粒，对目的蛋白进行诱导表达。其次，利用金属离子螯合层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析方法对目的蛋白进行分离纯化，纯化后的ArlR蛋白纯度可达98%，产量约为25 mg/L；纯化后的ArlS蛋白纯度可达90%，产量约为15 mg/L。圆二色谱检测结果显示纯化后的目的蛋白有完整的二级结构具有激酶活性。体外磷酸化结果显示，ArlS蛋白自磷酸化后可以将磷酸基团转移给反应调控蛋白ArlR。最后，利用定点突变的方法，构建了418位和420位氨基酸残基突变的表达载体pProEX-HTa-ArlSCAG418A和pProEX-HTa-ArlSCAG420A。ArlSCAG418A和ArlSCAG420A蛋白不具有激酶活性，说明418位和420位氨基酸残基在ArlS蛋白的自磷酸过程中起着关键作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 金黄色葡萄球菌是一类重要的病原菌，其毒力因子的表达及分泌过程由多种双组份信号转导系统（two component signal transduction system, TCSTS）共同调控，其中ArlRS双组份信号转导系统与细菌的生长和分裂密切相关。ArlRS双组份系统的信号传递通过组氨酸激酶ArlS磷酸化实现,ArlS的胞内域被认为是调控毒力因子表达的重要功能域, 本文以ArlS蛋白的胞内域部分即ArlSCA为目标蛋白进行相关的活性研究。首先构建pProEX-HTa-arls和pProEX-HTa-arlr重组质粒，对目的蛋白进行诱导表达。其次，利用金属离子螯合层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析方法对目的蛋白进行分离纯化，纯化后的ArlR蛋白纯度可达98%，产量约为25 mg/L；纯化后的ArlS蛋白纯度可达90%，产量约为15 mg/L。圆二色谱检测结果显示纯化后的目的蛋白有完整的二级结构具有激酶活性。体外磷酸化结果显示，ArlS蛋白自磷酸化后可以将磷酸基团转移给反应调控蛋白ArlR。最后，利用定点突变的方法，构建了418位和420位氨基酸残基突变的表达载体pProEX-HTa-ArlSCAG418A和pProEX-HTa-ArlSCAG420A。ArlSCAG418A和ArlSCAG420A蛋白不具有激酶活性，说明418位和420位氨基酸残基在ArlS蛋白的自磷酸过程中起着关键作用。
分类： 农、林、牧、渔 >> 农业基础学科 提交时间： 2017-11-07 合作期刊: 《中国生态农业学报》
摘要： 砂姜黑土是我国典型的中低产田土壤类型, 研究其在土壤微生物驱动下的氮素转化过程及其机制, 可为定向调控土壤氮素转化过程, 提高氮素利用效率并减少其负面效应提供科学依据。试验设置0 kg·hm2、120 kg·hm2、225 kg·hm2 和330 kg·hm2 4 个供氮量, 分别于冬小麦越冬期、拔节期、抽穗期、开花期、灌浆期和成熟期测定小麦根际土壤氮转化相关微生物作用(氨化作用、硝化作用和反硝化作用)强度和土壤氮素转化相关酶(脲酶、蛋白酶)活性, 土壤净氮素矿化速率、土壤硝态氮和铵态氮含量的变化, 研究影响砂姜黑土麦田土壤氮素转化的生物学因素及其对不同供氮量的响应。结果表明, 土壤氮素转化微生物及酶活跃时期为拔节到灌浆期, 灌浆期之后土壤氨化作用强度、硝化作用强度、脲酶及蛋白酶活性降低; 土壤净氮素矿化速率与土壤氮素转化微生物作用强度及酶活性的活跃期较为一致, 在开花前后达到最高。除脲酶活性随供氮量增加持续上升外, 土壤氮素转化微生物作用强度及蛋白酶活性均随供氮量的增加, 在225 kg·hm2 处理下达到最高,进一步增加供氮量至330 kg·hm2, 微生物作用强度及酶活性均表现出不同程度的下降。可见, 砂姜黑土土壤氮素转化的活跃期与小麦需氮高峰期基本一致, 有利于冬小麦的生长。但由于砂姜黑土中土壤硝化作用强度较低, 土壤硝化能力有限, 从而降低了氮素可利用性, 且增加了土壤氨挥发损失的潜在风险。在一定范围内增加供氮量, 有利于土壤氮素的转化, 但供氮过多(330 kg·hm2)则不利于砂姜黑土供氮能力的提高。
点击量
点击量
下载量
评论
