分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的探讨哇巴因对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)内Ca2+浓度的影响。方法用组织块贴壁法进行大鼠胸主动脉VSMCs原代培养，用免疫组织化学方法进行细胞鉴定，采用放射自显影术检测哇巴因对大鼠胸主动脉VSMCs的结合能力，采用Fluo 3-AM(钙离子荧光探针)法研究哇巴因在短时间内对VSMCs细胞内Ca2+浓度的影响，探讨不同浓度的钠泵a2亚单位截断性片段的拮抗作用。结果(1)放射自显影术检测结果显示，哇巴因与VSMCs间有一定的结合能力在0.1-100 nmol/L浓度范围，随着哇巴因浓度的增加，VSMCs与哇巴因的结合能力增加;(2)Fluo 3-AM检测VSMCs内Ca2+浓度 结果显示:不同浓度的哇巴因在短时间内能够引起VSMCs内Ca2+浓度的变化。在0-3200 nmol/L浓度范围，细胞内Ca2+离子浓度会随着哇巴因浓度的增加呈现出逐渐升高的趋势;(3)不同浓度的钠泵a2亚单位截断陛片段可以拮抗哇巴因引起的VSMCs内Ca2+浓度的升高作用。结论哇巴因引起的细胞内高钙是高哇巴因高血压发生的细胞学基础，钠泵a2亚单位截断性片段可以拮抗哇巴因引起的VSMCs内Ca2+浓度的升高作用，为进一步探讨哇巴因的作用机制结高血压的治疗提供了实验依据
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的采用多肤制备技术和免疫学技术制备抗钠泵α2亚单位截断性片段及其抗体，为检测和研究钠泵α2亚单位的组织学分布及其功能研究提供实验基础。方法根据NCBI-Genebank获得大鼠钠泵α2亚单位Ml-M2膜外区截断性片段目的多肤CLAAMEDEPSNDN)，采用9-氟甲氧碳基(Chm00)固相合成法合成目的多肤，并采用碳化二亚胺法制备出多肤与孔戚血蓝素复合物，免疫新西兰大白兔，免疫4次后获得抗血清，测定其效价。随后采用protein A纯化IgG抗体，并将其用于大鼠主动脉血管平滑肌细胞钠泵α2亚单的组织学检测。结果(1)人工合成的大鼠钠泵。2亚单位截断性片段长13氨基酸残基(LAAMEDEPSNDN-C)，理论相对分子质量:1408.48，质谱实测相对分子质量:1407.90;高效色谱分析纯度HPLC纯度>>85.5 % ;(2)ELISA法检测免疫后兔子的抗血清效价均大于1:512 000，蛋白A亲和纯化获得亲和纯化抗体浓度为0.965 mg/ml，按照1:1000稀释(终浓度1 wg/ml) , ELL9A检测抗体效价为1 :256000; }3)该抗体按照1:100-1:200稀释可用于免疫细胞学检测。结论成功制备高效价抗钠泵α2亚单位截断性片段抗体可用于钠泵α2亚单位的ELISA和免疫细胞化学实验，为钠泵α2亚单位的组织细胞学检测和功能研究提供新的实验基础。
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