分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2018-06-15 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的:检测ABCA1敲低对巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症应答的影响。方法构建小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的ABCA1敲低的稳定细胞系,以TLR2配体Pam3CSK4刺激该细胞系建立炎症反应细胞模型,在该细胞模型上检测相关促炎和抗炎细胞因子转录水平的表达变化。结果ABCA1敲低的RAW264.7稳定细胞株在Pam3CSK4刺激后,IL-1β,TNF-α和IL-6表达发生显著上调(P<0.01),而转录抑制因子cAMP依赖性转录因子3(ATF3)也发生显著上调(P<0.01);与此同时,ATF蛋白家族中其它因子ATF1,ATF2,ATF4和ATF5转录水平没有发生显著变化。结论在巨噬细胞RAW264.7中,ABCA1敲低显著上调Pam3CSK4引起的促炎因子IL-1β,TNF-α和IL-6的表达的同时,也显著上调了具有抗炎效应的ATF3的表达,其对炎症反应的影响可能并非是单向的促炎作用,而是发生双向的调节,而ABCA1参与上调ATF3表达的机制可能也与其ATF蛋白家族其他成员的上游调节机制不同。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的明确TOLL样受体2(TLR2)与mioroRNA144(miR-144)作用之间的关系。方法利用不同浓度的miR-144的模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)瞬时转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,RT-qPCR检测miR-144和TLR2及其下游分子TNF-α的表达。利用大鼠肝脏。DNA为模板,PCR获取目的片段(即含miR-144野生及突变结合位点的TLR2 mRNA的3'UTR区);用Sac I ,xha I双酶切pmirGLO报告基因载体和含miR-144野生及突变结合位点的TLR2 mRNA的3'UTR区,构建携带上述片段的双荧光素酶报告基因,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒,即emir-TLR2-3'UTR及emir-mutant-TLR2-3'UTR;并用miR-144的mimics与双荧光素酶报告基因共转染明确miR-144与TLR2mRNA的3'UTR区的靶向关系。结果瞬时转染100 nmol/L miR-144 mimics后,NR8383细胞中miR-144表达显著升高,而TLR2及其下游分开TNF-a寻r达显著下降;而100 nmol/LmiR-144 inhibitor作用则相反。PCR和双酶切DNA测序结果证实emir-TLR2-3'UTR及emir-mutant-TLR2-3'UTR重组载体构建成功;用100 nmol/L miR-144 mimics与空载体及上述两个构建体分别共转染HEK 293T细胞后,emir-TLR2-3'UTR转染组相对荧光素酶活性显著降低。结论miR-144通过靶向结合TLR2 mRNA的3'UTR区负性调节TLR2及其下游促炎因子的表达。