分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 通过目的基因的随机整合方式，构建得到的CHO表达细胞系，常会因为目的基因插入到染色体内不稳定区域，而在长期传代过程中出现表达不稳定的现象，这主要是由于位点效应所导致。为了解决这个问题，现利用CRISPR/Cas9技术介导的同源重组，将目的基因直接整合于CHO细胞染色体上稳定表达区域，以克服位点效应带来的CHO表达细胞系的长期表达不稳定。现总共利用该技术获得了2株外源基因（人白蛋白基因）定点整合细胞系；western blot结果显示，细胞上清液的产物具有人白蛋白抗原性；细胞在贴壁状态下，两株细胞系在第3、12、23、35、50代，细胞每日表达的HSA质量接近，且均维持在0.5 pg/cell/day；选取一株表达细胞系，经悬浮驯化后，在批次条件培养下，第1、25及50代的悬浮细胞，在摇瓶内的表达浓度均稳定在13-14 mg/L。本研究显示了将外源基因基因定点整合于CHO细胞基因组内的的可行性；且外源基因整合在稳定表达区域后，重组细胞系具有对外源基因长期表达的稳定性。
分类： 材料科学 >> 材料科学（综合） 提交时间： 2023-03-18 合作期刊: 《材料研究学报》
摘要： 研究了在不同水化学环境下砂浆试样力学特性劣化及其微细观结构损伤的演化, 并探讨其力学特性劣化的细观机制。结果表明, 化学腐蚀后试样峰值前的塑性变形有所增大。溶液对试样的化学腐蚀作用越强其塑性变形越大, 并具有明显的时间阶段性。腐蚀后试样塑性变形的变化, 间接地反映了化学溶液对砂浆试样的腐蚀程度。提出无损量测方法计算不同腐蚀时间段内砂浆试样的孔隙率, 并基于其孔隙率的变化建立了新的损伤变量。研究发现, 砂浆试样的化学损伤程度与其物理力学参数之间的一致性比较明显。这说明, 用基于化学腐蚀产生的次生孔隙率建立的损伤变量定量描述试样微细观结构的化学损伤程度及其物理力学特性随化学损伤的演化过程, 是合理的。
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