人源CT55蛋白原核表达及单克隆抗体的制备

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

任建委 李军 李尚泽

摘要： 为制备Cancer testis 55（CT55）单克隆抗体，需构建带有人源CT55片段的原核表达质粒，把该质粒转化Rosetta感受态进行原核表达并得到目的蛋白，蛋白被纯化后免疫6w雌性BALB/c小鼠。按传统的单克隆抗体的制备方法，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（sp2/0）进行融合，经ELISA方法筛选及两次连续亚克隆，共获得多株能稳定分泌抗 CT55蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，如3D8B7B12、4C8E1C9、3D8C10G9等。ELISA及Western Blot（WB）分析结果表明，筛选的细胞株均能产生单克隆抗体，且该抗体均分别能与原核表达及真核表达的CT55蛋白发生特异性结合。单克隆抗体可用于免疫荧光试验，且与P53发生互作的荧光主要位于细胞核边缘。结果表明，本研究成功制备了针对人源CT55 蛋白的单克隆抗体。CT55蛋白单克隆抗体的制备为今后肝癌、胃癌、结肠癌等癌症的快速的病原学诊断以及 CT55蛋白的结构和功能研究奠定了物质基础。

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