分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: [目的]大量表达非限制性核酸内切酶Sma并获得高纯度目的蛋白,并对其酶活进行鉴定。[方法]PCR获得Sma基因片段,构建pET28a-ompA-Sma表达载体,转入E. coli BL21(DE3)中,筛选出不同培养基下,目的蛋白可溶表达量最高的条件。通过渗透休克方法提取目的蛋白,并经离子交换纯化。检测不同的温度条件下Sma的酶活,并与商品化产品进行比较。[结果]经PCR和测序证明重组蛋白表达质粒构建正确。可溶蛋白产量为7mg/L,每L培养基获得7300KU的Sma,纯化后纯度>95%,活性达273U/μl,(商品化产品为250U/μl)。 [结论]成功地表达了可溶性非限制性核酸内切酶Sma,纯度高,活性好,各项条件下活性皆不低于商品化产品。
分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: [目的]大量表达非限制性核酸内切酶Sma并获得高纯度目的蛋白,并对其酶活进行鉴定。[方法]PCR获得Sma基因片段,构建pET28a-ompA-Sma表达载体,转入E. coli BL21(DE3)中,筛选出不同培养基下,目的蛋白可溶表达量最高的条件。通过渗透休克方法提取目的蛋白,并经离子交换纯化。检测不同的温度条件下Sma的酶活,并与商品化产品进行比较。[结果]经PCR和测序证明重组蛋白表达质粒构建正确。可溶蛋白产量为7mg/L,每L培养基获得7300KU的Sma,纯化后纯度>95%,活性达273U/μl,(商品化产品为250U/μl)。 [结论]成功地表达了可溶性非限制性核酸内切酶Sma,纯度高,活性好,各项条件下活性皆不低于商品化产品。