邵建立，李志忠，王亮，焦根龙，周志刚，孙国栋

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》

徐若霆；周辉；刘玮璐；吴炜；刘鲜艳；张文强；谭洁；赵明

摘要： 目的 构建人细胞表面黏附分子P选择素（p-selectin）基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-pselectin-promoter，检测其转录活性，并应用于筛选药物对其转录活性的影响。方法 根据UCSC软件查找的人基因组DNA的p-selectin启动子序列并设计两端引物，扩增人基因组DNA中的p-selectin启动子。用限制性内切酶KpnⅠ和XhoⅠ双酶切质粒pGL3-Basic和p-selectin启动子后，将p-selectin基因启动子插入到pGL3-basic报告基因载体上。重组质粒命名为pGL3-pselectin-promoter。将其与内参质粒pRL-SV40瞬时共转染293F细胞，检测双荧光素酶活性。对不同启动子片段长度的p选择素报告基因进行双荧光素酶的检测。以炎症因子和药物分组刺激转染了报告基因质粒的293F细胞并检测双荧光素酶活性。结果 成功构建p-selectin基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-pselectin-promoter，质粒酶切及测序结果完全正确。瞬时共转染pGL3-pselectin-promoter/pRL-SV40 组荧光素酶活性为 0.8573±0.4703，高于转染 pGL3-Basic/pRL-SV40 组的荧光素酶活性值 0.03955±0.05894。pGL3-1826 bp相比较于pGL3-1092 bp组和pGL3-3738 bp组具有最强的转录活性。炎症因子LPS和TNF-α和药物As 2 O 3 均具有上调pGL3-pselectin-promoter转录活性的作用。结论 pGL3-pselectin-promoter在293F细胞中能被转录激活，并验证了炎症因子对其转录表达的作用，并为药物筛选与评价提供解决方案。

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