海藻多糖通过下调肝癌细胞Hep3B糖酵解途经抑制细胞增殖和迁移

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

冯源 唐云 徐蕾

摘要： 摘要 目的：探讨海藻多糖（Algal Polysaccharides，AP）对肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移的影响及其可能的作用机制，为治疗肝癌提供新的思路。方法：1）比较正常细胞与癌细胞中糖酵解途经（Embden-Meyerhof-Parnas，EMP）的表达差异，用紫外分光光度计比色法检测EMP限速酶酶活力：已糖激酶（Hexokinase， HK），丙酮酸激酶（Pyruvate kinase， PK）， 用乳酸测定试剂盒测定EMP产物：乳酸；2）AP处理Hep3B后，检测EMP表达水平变化；3）AP处理细胞后，检测肝癌细胞Hep3B细细胞的增殖和迁移能力及上皮细胞-间充质转化（EMT）的影响，方法包括MTT、qPCR和Transwell小室实验；4）MTT、Transwell和qPCR检测HK抑制剂3-溴丙酮酸（3-Bromopyruvate，3-BrPA）对肝癌Hep3B细胞的活力和迁移能力及EMT的影响；5）Western Blot和相关试剂盒检测海藻多糖与3-BrPA分别处理细胞时，对EMP水平以及Akt通路的影响；6）AP联合3-BrPA处理HepB3后，检测HK和Akt信号通路表达水平及细胞活力和迁移的变化。结果：1) 癌细胞（Hep3B，Hela，SW480）EMP代谢水平均高于正常肝细胞（HL02），其中Hep3B差异最为显著；2) AP能抑制 Hep B细胞 EMP代谢水平，且抑制程度随着AP浓度升高而升高，存在浓度依赖性；3) AP可抑制肝癌 Hep3 B细胞的增殖和迁移，且抑制EMT的发生。AP浓度为200 mg/ mL，处理时间为48 h时，生长抑制率达（55±2.8）%，细胞迁移数为对照组的（32±2.9）%；4) 3-BrPA可下调Hep3B细胞HK活性，并抑制细胞活力与迁移，且抑制EMT的发生。200 μmol/ L3- BrPA作用细胞48 h后，与对照组相比，细胞活性下降了（52±5.8）%（ p<0.001），细胞迁移数下降了（48±6.1）%（ p<[0.01]）; 5) 海藻多糖和3-BrPA均下调糖酵解代谢水平，且抑制Akt信号通路; 6) AP与3-BrPA联合处理Hep3B后，HK表达下降，显著抑制Akt信号通路，细胞活性和迁移能力均较海藻糖单用组显著下降（p<0.05）。结论：肝癌 Hep3 B细胞 EMP代谢水平高于正常肝细胞，海藻多糖可下调 Hep3B细胞 EMP代谢水平，低EMP代谢水平可能通过下调EMT和Akt信号通路抑制Hep3B的增殖和迁移。当AP和3- BrPA联合应用时，抑制肝癌迁移和增殖效果更明显。

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