分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 探讨miR-21在冷空气诱导的气道上皮免疫功能失调中的作用及其可能的潜在分子机制。方法 气-液双相法培养人永生化气道上皮细胞BEAS-2B及16HBE，通过逆转录荧光定量PCR法检测不同时间梯度冷暴露的细胞中内源性miR-21，miR-164，miR-155的水平改变。通过构建TLR-4 3’UTR端及其结合位点突变质粒，并与miR-21模拟物、miR-21抑制物以及对照共转染BEAS-2B及16HBE细胞，进行双荧光素酶标记试验证实TLR-4为miR-21的靶蛋白。利用lipofectamine2000分别将miR-21模拟物、miR-21模拟对照物、miR-21抑制物、miR-21抑制对照物转染给BEAS-2B及16HBE细胞，并给予常温（37 ℃）培养或冷暴露（30 ℃），以Western Blot法检测各实验组TLR-4/MyD88蛋白水平。结果 低温诱导气道上皮细胞内miR-21水平提高（P<0.05），而miR-164及miR-155无显著变化。低温提高气道上皮细胞内miR-21水平呈时间依赖性。双荧光素酶报告实验证实，TLR-4为miR-21的直接靶蛋白。Western Blotting法检测结果显示转染miR-21模拟物的BEAS-2B及16HBE细胞在常温培养下TLR-4/MyD88蛋白水平显著低于对照组（P<0.05），低温刺激可降低气道上皮细胞内TLR-4/MyD88的蛋白水平（P<0.05）；而使用miR-21抑制物处理，可部分抑制低温诱导的TLR-4/MyD88的蛋白水平下调（P<0.05）。结论 低温刺激可能通过提高气道上皮细胞内miR-21水平，降低TLR-4/MyD88蛋白水平，影响气道上皮免疫功能。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 通过干预瞬时受体电位通道C1（TRPC1）的表达，探讨TRPC1离子通道在气道重塑演变过程中的作用机制及布地奈德的干预作用。方法 雄性普通级豚鼠50只，随机均分为5组：A组为空白对照组、B组为卵蛋白刺激组、C组为卵蛋白刺激+TRPC1 siRNA干扰组、D组为卵蛋白刺激+荧光素酶siRNA干预组、E组为卵蛋白刺激+布地奈德干扰组。取肺泡灌洗液（BALF），比较嗜酸性粒细胞（Eos）占总细胞数的百分比；酶联免疫吸附法（ELISA）测定BALF中IL-5，IL-13表达水平。取支气管肺组织行苏木精-伊红染色（HE）、马松三色染色（Maason），Image-Pro图像处理软件定量分析支气管壁厚度、平滑肌增殖及胶原沉积情况。免疫组化法观察TRPC1蛋白在肺内相对表达水平。实时荧光定量PCR法测定TRPC1 mRNA的相对表达。 结果 Image-Pro图像软件分析结果示，B组显著表现出支气管壁增厚、平滑肌增殖、基底膜胶原沉积、气道周围炎症细胞浸润、炎症因子增加等病理变化，C组、E组的上述病理变化则不明显（P<0.05）。进一步行免疫组化法显示，TRPC1蛋白位于支气管上皮粘膜层，主要分布于支气管粘膜基底细胞、柱状上皮细胞的胞膜及胞核内。结论 TRPC1通道在哮喘个体的高水平表达与气道重塑、慢性气道炎症的发生、发展密切关联；而布地奈德可在一定程度上通过调节TRPC1的表达参与气道重塑的演变。
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