分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 优化并全合成里氏木霉几丁质酶基因，在毕赤酵母中实现分泌表达。产物几丁质酶的蛋白浓度达0.17 mg/mL，最适pH为5.6，最适温度为65 ℃，酶活为0.52 U/mL。该酶在50 ℃及以下较稳定。利用该酶水解低脱乙酰度壳聚糖并对产物的组成及结构进行分析。超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（Ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC-QTOF MS）检测及分析结果显示，酶解产物中包含至少41种聚合度2-18，不同脱乙酰度的壳寡糖组分；核磁共振（Nuclear magnetic resonance，NMR）检测及分析结果显示，产物壳寡糖的还原端主要为N-乙酰氨基葡萄糖，非还原端则同时含有N-乙酰氨基葡萄糖及氨基葡萄糖。相关结果可为壳寡糖的结构与功能关系研究提供参考。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-06-14 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 对来源于枯草芽孢杆菌菌株168（Bacillus subtilis 168）的壳聚糖酶编码基因进行了序列优化及全合成并在毕赤酵母（Pichia pastoris）中实现了分泌表达，表达产物的蛋白浓度达到0.30 mg/ml。表达的壳聚糖酶最适pH为5.6，最适温度为55 ℃，比酶活达84.54 U/ml。该酶在50 ℃及以下较稳定。利用该酶水解低脱乙酰度壳聚糖并使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（Ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC-QTOF MS）对产物的组分进行了分离及鉴定。根据一级质谱信息，推测酶解产物中包含至少37种聚合度2-18，不同脱乙酰度的壳寡糖组分。综上，利用毕赤酵母分泌表达了来源于枯草芽孢杆菌菌株168的壳聚糖酶基因，利用表达产物水解制备了低脱乙酰度壳寡糖并对其组分进行了分析，可为后续壳寡糖结构与功能关系的研究提供参考。
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