高效构建卵清白蛋白scFv噬菌体文库及其筛选

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

郎巧利 余琳 何麒麟 葛良鹏 杨希

摘要： 目的：建立一种高效噬菌体文库构建方法，获得抗鸡卵清蛋白（ovalbumin, OVA）的单链抗体（scFv）噬菌体展示文库，筛选鉴定获得OVA单链抗体。方法：用OVA蛋白免疫Balb/C小鼠，选取血清抗体效价高的小鼠提取脾脏RNA，利用RT-PCR方法扩增获得小鼠重链和小鼠轻链基因。通过无缝连接酶一步将小鼠重链基因、轻链基因和linker DNA连接起来，插入噬菌体表达载体中，构建OVA scFv噬菌体展示文库。测定文库容量，对文库进行富集筛选，ELISA鉴定阳性克隆，测序后构建真核表达载体，转入Expi-CHO悬浮细胞进行真核表达，利用Western blot进行鉴定。结果：成功获得库容量为1.2×107cfu的OVA scFv噬菌体展示文库，并从中筛选出8个阳性克隆，选取效价最高的2号克隆，在Expi-CHO悬浮细胞中表达获得可溶性抗体。结论：本研究建立了一种高效构建scFv噬菌体文库的方法，筛选获得高结合活性的OVA单链抗体，并成功进行了真核表达，为OVA ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。

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