Subjects: Biology >> Bioengineering submitted time 2018-08-13 Cooperative journals: 《中国生物工程杂志》
Abstract：优化并全合成里氏木霉几丁质酶基因，在毕赤酵母中实现分泌表达。产物几丁质酶的蛋白浓度达0.17 mg/mL，最适pH为5.6，最适温度为65 ℃，酶活为0.52 U/mL。该酶在50 ℃及以下较稳定。利用该酶水解低脱乙酰度壳聚糖并对产物的组成及结构进行分析。超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（Ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC-QTOF MS）检测及分析结果显示，酶解产物中包含至少41种聚合度2-18，不同脱乙酰度的壳寡糖组分；核磁共振（Nuclear magnetic resonance，NMR）检测及分析结果显示，产物壳寡糖的还原端主要为N-乙酰氨基葡萄糖，非还原端则同时含有N-乙酰氨基葡萄糖及氨基葡萄糖。相关结果可为壳寡糖的结构与功能关系研究提供参考。
Subjects: Biology >> Bioengineering submitted time 2018-06-14 Cooperative journals: 《中国生物工程杂志》
Abstract：对来源于枯草芽孢杆菌菌株168（Bacillus subtilis 168）的壳聚糖酶编码基因进行了序列优化及全合成并在毕赤酵母（Pichia pastoris）中实现了分泌表达，表达产物的蛋白浓度达到0.30 mg/ml。表达的壳聚糖酶最适pH为5.6，最适温度为55 ℃，比酶活达84.54 U/ml。该酶在50 ℃及以下较稳定。利用该酶水解低脱乙酰度壳聚糖并使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（Ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC-QTOF MS）对产物的组分进行了分离及鉴定。根据一级质谱信息，推测酶解产物中包含至少37种聚合度2-18，不同脱乙酰度的壳寡糖组分。综上，利用毕赤酵母分泌表达了来源于枯草芽孢杆菌菌株168的壳聚糖酶基因，利用表达产物水解制备了低脱乙酰度壳寡糖并对其组分进行了分析，可为后续壳寡糖结构与功能关系的研究提供参考。
Subjects: Biology >> Bioengineering submitted time 2017-11-21 Cooperative journals: 《中国生物工程杂志》
Abstract：为了延长重组睫状神经营养因子在体内的保留半衰期，基于CNTF中天然的游离半胱氨酸残基，前期工作中我们采用聚乙二醇修饰和转铁蛋白偶联的两种方式对CNTF进行改造。本研究中我们采用常规分析手段对PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF进行对比表征。高效凝胶过滤和动态光散射分析结果显示两者拥有相近的表观分子体积。细胞试验结果显示两种耦合物的活性分别下降至未修饰CNTF的50.6%和65.8%。抗体CNTF抗体亲和力结果显示PEG20k修饰后亲合力下降至原蛋白的3.8%，转铁蛋白偶联后保留89.9%原蛋白亲合力。药代动力学结果显示PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF在SD大鼠血液中的保留半衰期分别为5.34 ± 0.26和8.65 ± 0.60小时，与未修饰rhCNTF相比延长了约21.4倍和34.6倍。药效学结果显示在每周两次每次1.0 mg/kg （rhCNTF等量）的给药频率和剂量，PEG20k-CNTF比Tf-PEG5k-CNTF更显著地降低实验小鼠体重。
Subjects: Biology >> Bioengineering submitted time 2017-11-21 Cooperative journals: 《中国生物工程杂志》
Abstract：为了延长重组睫状神经营养因子在体内的保留半衰期，基于CNTF中天然的游离半胱氨酸残基，前期工作中我们采用聚乙二醇修饰和转铁蛋白偶联的两种方式对CNTF进行改造。本研究中我们采用常规分析手段对PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF进行对比表征。高效凝胶过滤和动态光散射分析结果显示两者拥有相近的表观分子体积。细胞试验结果显示两种耦合物的活性分别下降至未修饰CNTF的50.6%和65.8%。抗体CNTF抗体亲和力结果显示PEG20k修饰后亲合力下降至原蛋白的3.8%，转铁蛋白偶联后保留89.9%原蛋白亲合力。药代动力学结果显示PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF在SD大鼠血液中的保留半衰期分别为5.34 ± 0.26和8.65 ± 0.60小时，与未修饰rhCNTF相比延长了约21.4倍和34.6倍。药效学结果显示在每周两次每次1.0 mg/kg （rhCNTF等量）的给药频率和剂量，PEG20k-CNTF比Tf-PEG5k-CNTF更显著地降低实验小鼠体重。
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