抗钠泵α2亚单位截断性片段多肤抗体的制备与鉴定

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》

张明娟；张美程；朱参战；张超英；段宗明

摘要： 目的采用多肤制备技术和免疫学技术制备抗钠泵α2亚单位截断性片段及其抗体，为检测和研究钠泵α2亚单位的组织学分布及其功能研究提供实验基础。方法根据NCBI-Genebank获得大鼠钠泵α2亚单位Ml-M2膜外区截断性片段目的多肤CLAAMEDEPSNDN)，采用9-氟甲氧碳基(Chm00)固相合成法合成目的多肤，并采用碳化二亚胺法制备出多肤与孔戚血蓝素复合物，免疫新西兰大白兔，免疫4次后获得抗血清，测定其效价。随后采用protein A纯化IgG抗体，并将其用于大鼠主动脉血管平滑肌细胞钠泵α2亚单的组织学检测。结果(1)人工合成的大鼠钠泵。2亚单位截断性片段长13氨基酸残基(LAAMEDEPSNDN-C)，理论相对分子质量:1408.48，质谱实测相对分子质量:1407.90;高效色谱分析纯度HPLC纯度>>85.5 % ;(2)ELISA法检测免疫后兔子的抗血清效价均大于1:512 000，蛋白A亲和纯化获得亲和纯化抗体浓度为0.965 mg/ml，按照1:1000稀释(终浓度1 wg/ml) , ELL9A检测抗体效价为1 :256000; }3)该抗体按照1:100-1:200稀释可用于免疫细胞学检测。结论成功制备高效价抗钠泵α2亚单位截断性片段抗体可用于钠泵α2亚单位的ELISA和免疫细胞化学实验，为钠泵α2亚单位的组织细胞学检测和功能研究提供新的实验基础。

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