分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-03-15 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 本研究旨在分析毒性结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, M.tb）H37Rv刺激RAW264.7巨噬细胞的表达谱芯片以及筛选和鉴定M.tb H37Rv感染巨噬细胞RAW264.7后差异表达的lncRNAs,。首先，分析热灭活的H37Rv刺激RAW264.7细胞24h后lncRNA表达谱芯片，并对差异表达的lncRNA和mRNA进行生物信息分析，然后采用实时定量聚合酶链反应对16条在芯片中差异表达的lncRNA进行细胞水平验证；进一步在H37Rv感染小鼠的脾脏和肺脏中检测差异表达的lncRNA。结果显示表达谱芯片中4730条lncRNAs的表达水平上调, 9558条lncRNAs的表达水平下调。生物信息分析筛选的16条lncRNA，其染色体定位于附近蛋白编码基因的基因间区或者与外显子区域有重叠，mRNAs功能注释显示差异表达的mRNAs主要集中于转录调节、磷酸化、凋亡等生化过程以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等抗结核的信号通路中。在H37Rv作用下的细胞水平和动物感染模型的组织中RT-qPCR验证出与芯片结果相同的4条lncRNAs，其中上调的有3条，下调的有1条。本研究中异常表达的lncRNA可能为巨噬细胞在结核分枝杆菌感染中的功能紊乱提供线索，为后续的研究奠定了基础，进一步的研究将集中于发掘lncRNA在宿主调控中发挥的功能。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-12-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：CD19单链抗体可变区（single-chain fragment variable）scFv能特异性识别结合B细胞表面的CD19分子，白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）是调节性B细胞（Breg）的主要特征之一。这篇文章旨在构建CD19scFv和IL-10受体1（IL-10R1）胞外段的重组融合蛋白，拟用该融合蛋白捕捉和封闭Breg细胞分泌的IL-10。方法：CD19scFv和IL-10R1胞外段克隆到pET-28a原核质粒上，E. coli BL21（DE3）工程菌表达蛋白通过镍柱富集和纯化蛋白，SDS-PAGE和Western Blot对表达蛋白进行鉴定，pull down实验验证蛋白与CD19分子和IL-10细胞因子的结合。结果：成功表达CD19scFv-IL-10R1融合蛋白,该融合蛋白能在体外同时结合CD19和IL-10分子。结论：CD19scFv-IL-10R1融合蛋白在体外可以同时结合CD19分子和IL-10分子，具有潜在应用前景可作为特异性抑制Breg的生物小分子。
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