分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 脂肪酶是一类重要的工业用酶，广泛应用于诸多工业领域。与游离脂肪酶、物理或化学固定化脂肪酶相比，全细胞脂肪酶具有制备简单、无需蛋白质提取纯化、天然固定化、稳定性及抗逆性更好、制备及设备成本较低等优点，因此以全细胞形式利用脂肪酶被誉为是最有前景的降低生物转化成本的方法之一，关于全细胞脂肪酶的研究一直是脂肪酶领域的热点。本文就全细胞脂肪酶的研究进展进行归纳和述评，包括野生型全细胞脂肪酶和基因工程全细胞脂肪酶，并对其未来研究方向做出展望，以期为后续研究提供有益参考。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 作为桉叶油的主要成分，桉叶素是具有多种生物活性的单萜化合物，被广泛应用于药品、食品及化妆品等领域。桉叶油主要从桉树叶提取，该过程耗费大量人力及自然资源，且容易污染环境。近年来,随着微生物代谢工程与合成生物学的快速发展,加上越来越多萜类生物合成途径得到解析，为桉叶素的绿色生产提供了新的途径。本文对桉叶素的生物合成途径、桉叶素合酶的结构与功能及近年来桉叶素的微生物合成进行了综述，并对利用微生物代谢工程合成桉叶素等单萜化合物的瓶颈问题及解决方案进行了探讨和归纳，为构建高产桉叶素等单萜微生物工程菌株提供参考。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：探究miR-196a-5p对小鼠前体脂肪细胞增殖、分化的影响及其潜在的分子机制。方法：①构建小鼠肥胖模型，RT-PCR检测脂肪组织中miR-196a-5p表达量；②鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化，RT-PCR检测分化过程中miR-196a-5p的表达变化；③合成miR-196a-5p mimics和inhibitors转染3T3-L1细胞，以CCK8、EdU试剂盒检测miR-196a-5p对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响作用；④运用油红O染色、甘油三酯测定评估miR-196a-5p对3T3-L1细胞分化的影响；⑤RT-PCR检测miR-196a-5p对前脂肪细胞增殖、分化相关基因的影响；⑥ 结合前人文献，运用生物信息软件、荧光素酶报告系统对miR-196a-5p调控脂肪细胞分化的靶基因进行筛选和验证。结果：①miR-196a-5p在肥胖小鼠脂肪组织中高表达，在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中先升高后下降；②与阴性对照组相比，mimics转染抑制了3T3-L1细胞增殖，inhibitors转染促进了3T3-L1细胞增殖；③ 与阴性对照组相比，mimics组积累了大量油红着色的脂滴，甘油三酯含量增多；而inhibitors组的脂滴少而小，甘油三酯含量相对降低；④与阴性对照组相比，mimics转染抑制了增殖标志基因Cyclin D1、Cyclin E、CDK2和CDK4表达，促进了分化标志基因PPARγ、C/EBPα、LPL、aP2等的表达；inhibitors转染则表现出与mimics转染相反的作用；⑤miR-196a-5p可显著抑制野生型MAP4K3和MAPK1 3'UTR荧光素酶活性，而突变绑定位点可废除该抑制效应。结论：miR-196a-5p不仅可抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖，还可促进其诱导分化、沉积脂滴；miR-196a-5p可能通过靶向调节MAP4K3和MAPK1来介导3T3-L1前脂肪细胞分化。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 为制备Cancer testis 55（CT55）单克隆抗体，需构建带有人源CT55片段的原核表达质粒，把该质粒转化Rosetta感受态进行原核表达并得到目的蛋白，蛋白被纯化后免疫6w雌性BALB/c小鼠。按传统的单克隆抗体的制备方法，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（sp2/0）进行融合，经ELISA方法筛选及两次连续亚克隆，共获得多株能稳定分泌抗 CT55蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，如3D8B7B12、4C8E1C9、3D8C10G9等。ELISA及Western Blot（WB）分析结果表明，筛选的细胞株均能产生单克隆抗体，且该抗体均分别能与原核表达及真核表达的CT55蛋白发生特异性结合。单克隆抗体可用于免疫荧光试验，且与P53发生互作的荧光主要位于细胞核边缘。结果表明，本研究成功制备了针对人源CT55 蛋白的单克隆抗体。CT55蛋白单克隆抗体的制备为今后肝癌、胃癌、结肠癌等癌症的快速的病原学诊断以及 CT55蛋白的结构和功能研究奠定了物质基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 近年来，以小分子化合物为半抗原的免疫分析技术在食品药品、环境保护等领域已有诸多应用，并取得了较为理想的检测效果。小分子化合物只能与载体偶联形成人工抗原后，方能借助T细胞表位间接诱导B细胞进行增殖与分化，进而产生特异性抗体。高效的人工抗原的合成是保证免疫分析的前提和关键，本文就近年来国内外有关人工抗原合成过程中所涉及的小分子半抗原的设计与合成方法、载体的选择、半抗原与载体的偶联方法、人工抗原的纯化及鉴定方法等进行综述。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 从烟台海滨水域分离出一株海洋单细胞微藻。通过形态学鉴定和18S rDNA基因序列分析确定该株真核微藻属于四爿藻属（Tetraselmis sp.），命名为138号藻种。利用Central Composite法的Box-Behnken实验设计优化了此藻株的原生质体备条件。获得了以原生质体制备率为目标函数的三元二次回归方程：Y1=88.30-0.19X1+2.44X2+2.28X3-0.95X1X2-3.13X1X3+3.78X2X3-9.85X12-7.95X22-7.22X32。得到最优制备条件：混合酶比例纤维素酶：果胶酶为5:2；混合酶浓度为4.5%（纤维素酶浓度为2.7%，果胶酶浓度为1.8%），；缓冲液pH为6.4，最高理论制备率81.5%。经过3次平行试验，实际得到的原生质体制备率为80.5%，与模型预测值的误差为1.24%。绿色荧光蛋白报告基因瞬时表达检测了所制备原生质体的转化能力。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：建立一种高效噬菌体文库构建方法，获得抗鸡卵清蛋白（ovalbumin, OVA）的单链抗体（scFv）噬菌体展示文库，筛选鉴定获得OVA单链抗体。方法：用OVA蛋白免疫Balb/C小鼠，选取血清抗体效价高的小鼠提取脾脏RNA，利用RT-PCR方法扩增获得小鼠重链和小鼠轻链基因。通过无缝连接酶一步将小鼠重链基因、轻链基因和linker DNA连接起来，插入噬菌体表达载体中，构建OVA scFv噬菌体展示文库。测定文库容量，对文库进行富集筛选，ELISA鉴定阳性克隆，测序后构建真核表达载体，转入Expi-CHO悬浮细胞进行真核表达，利用Western blot进行鉴定。结果：成功获得库容量为1.2×107cfu的OVA scFv噬菌体展示文库，并从中筛选出8个阳性克隆，选取效价最高的2号克隆，在Expi-CHO悬浮细胞中表达获得可溶性抗体。结论：本研究建立了一种高效构建scFv噬菌体文库的方法，筛选获得高结合活性的OVA单链抗体，并成功进行了真核表达，为OVA ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。
分类： 生物学 >> 分子生物学 提交时间： 2018-08-29
摘要： 受互补回文小RNA发现的启发, 本研究从小RNA水平考虑DNA互补回文模式的生物学功能，并揭示了非洲猪瘟病毒基因组中较长（14 bp以上）DNA互补回文模式的分布特征. 本研究中公开的非洲猪瘟病毒基因组中的DNA互补回文模式可以用于设计引物或探针, 提高病毒检测的灵敏度和特异度；也可以直接用于设计小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）进行RNA干扰实验. 这样, 不需要病毒感染，更多的基础研究工作者可以使用这种间接方法研究非洲猪瘟病毒感染和致病机制. 本研究提供的研究病毒基因组中DNA互补回文模式的思路和方法，可以推广到其他微生物或动植物基因功能或进化研究领域, 具有重要的理论意义.
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