FoxM1 shRNA慢病毒载体构建及感染人前列腺癌细胞的稳定细胞株筛选

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》

王一茹 姚斌伟 张艳 张明博 高菡静 唐杰

摘要： 目的 构建携带绿色荧光蛋白（GFP）的人FoxM1 shRNA重组慢病毒载体，并构建筛选FoxM1敲低的人前列腺癌稳定细胞株，检测FoxM1的表达及对细胞增殖能力的影响。方法 设计并合成3对特异性针对人FoxM1基因的shRNA靶序列，构建到pHBLV-U6-ZsGreen-Puro 慢病毒载体中，测序鉴定载体构建情况，利用慢病毒三质粒系统转染包装293T细胞，荧光显微镜下观察转染效率。收集到的病毒上清转染人前列腺癌DU-145细胞，Real-time PCR检测各组细胞FoxM1 mRNA水平，经嘌呤霉素筛选建立FoxM1敲低稳定细胞株，用Western blotting法检测细胞中FoxM1表达，并用MTT法观察稳转细胞的生长增殖活性，流式细胞术观察稳转细胞凋亡情况，平板克隆实验观察稳转细胞的克隆形成能力。结果 经测序鉴定成功构建了3对FoxM1shRNA慢病毒载体，并进行包装，感染DU-145细胞后Real-time PCR检测结果表明第1对慢病毒载体干扰效率最佳，嘌呤霉素抗性筛选建立了FoxM1敲低稳定细胞株，荧光显微镜观察感染效率较高，Western blotting结果显示细胞中FoxM1蛋白表达明显受到抑制，细胞的生长增殖能力明显受限，流式细胞术结果显示FoxM1敲低组细胞凋亡率高于对照组，平板克隆实验结果表明FoxM1敲低组细胞克隆形成能力下降。结论 本研究成功构建了FoxM1 shRNA慢病毒载体，建立了FoxM1敲低稳定前列腺癌细胞株，抑制细胞内FoxM1的表达能够抑制前列腺癌细胞DU-145的生长增殖、克隆形成能力，并能诱导细胞凋亡。

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