美洲大蠊内生菌几丁质酶基因的克隆、表达及其活性研究

摘要: 摘要【目的】对美洲大蠊内生粘质沙雷氏菌几丁质酶ChiA基因进行克隆、可溶性表达及功能验证。【方法】PCR扩增ChiA基因，TA亚克隆，构建重组表达载体ChiA/pET21b，生物信息学分析和低温诱导表达、SDS-PAGE、Western-Blot鉴定，打孔法对几丁质酶活性检测。【结果】PCR成功扩增了ChiA基因序列，该序列与Gen Bank上的S．marcescens ChiA基因序列同源性达99%；该序列编码571个氨基酸，并能够在原核系统中稳定表达。可溶性表达分析显示：通过低温诱导表达，获得可溶性的目的蛋白；活性试验发现:含目的蛋白的表达产物可分解几丁质，且活性强于美洲大蠊内生粘质沙雷氏菌。【结论】从美洲大蠊内生粘质沙雷氏菌基因组中成功克隆了几丁质酶ChiA基因，通过原核表达系统获得了具有较强活性的可溶性几丁质酶ChiA，为其应用奠定了基础。