盐穗木病程相关蛋白 HcPR10 抗血清的制备及鉴定

分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2020-08-02 合作期刊: 《广西植物》

张花 杨涛  衡友强  王艳

摘要： 病程相关蛋白（PRs）在植物抗病抗逆过程中发挥重要作用。盐穗木病程相关蛋白基因HcPR10（GenBank：KF673356）来自盐穗木（Halostachys capsica）在600 mmol·L-1 NaCl胁迫下的盐抑制差减文库。为探究盐穗木病程相关蛋白HcPR10发挥生物学功能的机制，通过体外表达和纯化HcPR10重组蛋白，制备特异性的HcPR10多克隆抗体。本研究采用双酶切构建原核重组表达载体pET28a-HcPR10，转化至大肠杆菌（Escherichia coli）BL21诱导表达，通过正交分析优化重组蛋白可溶性诱导表达的条件，利用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，基于纯化获得的His-HcPR10重组蛋白和转HcPR10拟南芥总蛋白，分别利用ELISA和Western Blotting检测抗血清效价和特异性。结果表明：成功构建重组表达载体pET28a-HcPR10；正交结果显示诱导温度27 ℃，诱导转速200 r·min-1，IPTG浓度0.7 mmol·L-1，诱导时间6 h条件下可诱导表达大量可溶性目的蛋白；ELISA检测抗HcPR10血清效价达1:243 000，Western Blotting印迹结果显示制备的抗血清可以与重组蛋白和转基因拟南芥（Arabidopsis thaliana）中异源表达的HcPR10蛋白特异性结合。获得了效价高、特异性强的盐穗木病程相关蛋白HcPR10抗血清，为进一步研究HcPR10的亚细胞定位及生物学功能奠定了基础。

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