分类： 医学、药学 >> 临床医学 提交时间： 2023-03-01 合作期刊: 《中国全科医学》
摘要： 背景Klotho与肾脏疾病的发生、发展密切相关，盐敏感性高血压(SSH)常伴随肾脏疾病的发生。目前klotho在SSH肾损伤中的作用及分子机制研究鲜见报道。目的 探讨klotho在SSH肾损伤中的作用及分子机制。方法 于2021-06-15选取大鼠肾小球系膜细胞株HBZY1为实验细胞，将实验细胞分为对照组与造模组，采用NaCl137 mmol/L和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)10-6mmol/L共同诱导的HBZY1细胞损伤模型模拟SSH肾损伤，收集细胞。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白质印记法(Western Blot)检测klotho mRNA和蛋白表达的差异。构建klotho干扰载体和过表达载体与血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)过表达载体，klotho干扰实验分为五组，包括对照组、空载组、klotho-siRNA1、klotho-siRNA2、klotho-siRNA3;klotho过表达实验分为三组，包括对照组、空载组、klotho过表达组；AT1R过表达实验分为三组，包括对照组、空载组、AT1R过表达组。将构建的载体转染至细胞中并验证转染效率。转染成功后将实验分两部分进行，第一部分实验验证klotho的肾脏保护作用，实验分组为四组，包括对照组、造模组、klotho过表达组与klotho干扰组，第二部分实验探索klotho的肾脏保护作用是否与AT1R相关，实验分为三组，包括造模组、klotho过表达组、klotho+AT1R过表达组。转染成功后进行下列检测，细胞计数试剂8(CCK-8)法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)含量，酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)含量，免疫共沉淀(Co-IP)检测klotho与AT1R相互作用的影响。结果 与对照组相比，造模组中klotho的m RNA水平与蛋白表达均下降(t=7.102、7.506,P=0.002、0.002)。与对照组相比，klotho-siRNA2干扰效果显著(P<0.001);klotho过表达组的klotho蛋白表达明显升高(P<0.001);AT1R过表达组的AT1R蛋白表达明显升高(P<0.001)。klotho对细胞活力及氧化应激损伤的影响：与对照组相比，造模组细胞活力下降(P<0.001)，细胞内ROS、MDA含量升高(P<0.001、P=0.004)，细胞内SOD含量下降(P=0.041)；与造模组相比，klotho过表达组细胞活力升高(P<0.001)，细胞内ROS、MDA含量下降(P<0.001、P=0.003)，细胞内SOD含量上升(P=0.018)；与造模组相比，klotho干扰组细胞活力下降(P<0.001)，细胞内ROS、MDA含量升高(P<0.001、P=0.002)，细胞内SOD含量下降(P=0.001)。klotho通过AT1R对细胞活力及氧化应激损伤的影响：与造模组相比，klotho过表达组细胞活力升高(P<0.001)，细胞内ROS、MDA含量下降(P<0.001、P=0.024)，细胞内SOD含量上升(P=0.007)；与klotho过表达组相比，klotho+AT1R过表达组细胞活力下降(P<0.001),klotho+AT1R过表达组细胞内ROS、MDA含量上升(P<0.001、P=0.001)，细胞内SOD含量下降(P=0.002)。Co-IP确定klotho与AT1R之间存在交互作用。结论 klotho通过与AT1R相互作用，抑制氧化应激损伤，从而在SSH肾损伤中发挥保护作用。
分类： 医学、药学 >> 临床医学 提交时间： 2023-01-28 合作期刊: 《中国全科医学》
摘要： 目的 探讨讨klotho在盐敏感性高血压肾损伤中的作用及分子机制。方法 采用NaCl 137mmol/L和血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）10-6mmol/L共同诱导的HBZY1细胞损伤模型模拟盐敏感性高血压肾损伤，收集细胞。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）与蛋白质印记法（Western Blot）检测 klotho mRNA和蛋白表达的差异。构建klotho干扰载体和过表达载体与血管紧张素Ⅱ受体-1（AT1R）过表达载体，将构建的载体转染至细胞中并验证转染效率。转染成功后进行下列检测，细胞计数试剂-8（CCK-8）法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞活性氧（ROS）含量，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）与超氧化物歧化酶（SOD）含量，免疫共沉淀（Co-IP）检测klotho与AT1R相互作用的影响。结果 与对照组相比，造模组klotho mRNA和蛋白的表达下降（P＜0.05）。klotho-siRNA2干扰效果最好；klotho过表达组的klotho表达升高，AT1R过表达组的AT1R表达升高，说明具有过表达效果。与对照组相比，造模组细胞活力下降，ROS与MDA含量升高，SOD含量减少（P＜0.05）；与造模组相比，klotho过表达组的细胞活力升高，ROS与MDA含量下降，SOD含量减少（P＜0.05），而klotho干扰组的细胞活力进一步下降，ROS与MDA含量进一步升高，SOD含量进一步减少（P＜0.05）。与造模组相比，klotho过表达组的细胞活力升高，ROS与MDA含量下降，SOD含量减少（P＜0.05），而klotho+AT1R过表达组的细胞活力下降，ROS与MDA含量升高，SOD含量减少（P＜0.05）。Co-IP确定klotho与AT1R之间存在相互作用。结论 klotho通过与AT1R相互作用，抑制氧化应激损伤，从而在盐敏感性高血压肾损伤中发挥保护作用。
分类： 医学、药学 >> 临床医学 提交时间： 2022-08-01 合作期刊: 《中国全科医学》
摘要： 【摘要】 背景 血尿酸（SUA）与高血压的发生发展密切相关，高血压患者常伴随甲状腺功能改变。但目前在甲状腺功能正常的高血压患者中，甲状腺激素水平与高尿酸血症（HUA）患病风险的相关研究鲜有报道。目的 探讨甲状腺功能正常的原发性高血压（EH）患者血清甲状腺激素水平与HUA的相关性。方法 回顾性选取2019年1月至2020年12月延安大学咸阳医院心血管内科收治的甲状腺功能正常的EH患者267例作为研究对象。根据是否合并HUA，分为非HUA组166例，合并HUA组101例。比较2组间的基本资料、SUA、促甲状腺激素（TSH）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）水平，并进行Pearson相关分析与多因素Logistic回归分析。结果 合并HUA组男性占比、体质指数（BMI）、舒张压（DBP）、吸烟人数、饮酒人数、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、血肌酐（Scr）、SUA、FT3水平均高于非HUA组，年龄低于非HUA组（均P＜0.05）。多因素Logistic 回归分析显示，男性较女性更易患HUA，BMI、TG、LDL-C、FT3、Scr水平升高与年龄是EH患者发生HUA的独立影响因素[OR(95% CI) 2.843 (1.121~7.215)，1.126(1.020~1.234)，1.824(1.300~2.560)，2.804(1.157~6.795) ，2.297(1.326~3.977) ，1.071(1.041~1.102)，0.959(0.931~0.989)]。Pearson相关分析显示，EH患者FT3水平与SUA呈正相关（r=0.327，P＜0.001）。结论 合并HUA的甲功正常的EH患者血清FT3水平较无HUA患者高，血清FT3水平升高与EH患者发生HUA密切相关，应引起临床医生重视。
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