分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-04-19 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： SpyCatcher和SpyTag可通过自发反应形成共价键，产生稳定的分子自组装体。酶分子自组装体因具有高效有序的催化特性在合成生物学和纳米技术领域具有重要的应用价值。为探索SpyTag/SpyCatcher在大肠杆菌胞内多酶复合体系形成有序自组装分子能力，将SpyCatcher和SpyTag分别与P450BM3m单加氧酶和葡萄糖脱氢酶GDH进行融合表达，以期产生具有辅酶再生循环系统、高效生物合成靛蓝分子的SpyTag/SpyCatcher双酶自组装复合体。首先，通过电泳及质谱对重组工程菌表达蛋白进行分析，证实SpyCatcher-P450BM3m与SpyTag-GDH在胞内成功形成了自组装多酶复合体；然后，系统分析了不同培养条件下组装体合成靛蓝的能力，结果发现，经0.5mmol/L IPTG诱导后，菌体在16 ℃继续培养18 h后，工程菌对吲哚（2 mmol/L）与葡萄糖（4 mmol/L）的全细胞催化能力最强，靛蓝产量最高达258 mg/L，是未组装多酶系统的1.9倍，比P450BM3m单酶表达系统高约2.4倍；反应70 min后达到反应平衡，转化率为52%。本研究成功实现了SpyTag/SpyCatcher介导的多酶体系在大肠杆菌细胞中的自组装和高效转化体系，为胞内多酶复合物组装体的设计提供了新思路。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《分子影像学杂志》
摘要： 目的 运用中耳Micro-CT扫描数据进行三维重建，采用有限元方法对听骨链运动规律及鼓膜振动特性进行生物力学研究。 方法 通过对比鼓膜凸、镫骨足板振幅实验数据验证模型，并进行频率响应分析及模态分析。 结果 在不同频率下听骨链振动与转动均不一样，三块听小骨围绕一定的转动轴进行转动和摇摆运动，接近鼓膜凸处的锤骨柄做同相位转动和平动，镫骨足板做活塞平动。在频率1000 Hz下鼓膜整体弯曲变形局部高达2.32e-006 m，出现在环韧带附近；鼓膜凸最大变形约1.0e-007 m。鼓膜环韧带在声压激励下容易发生扭曲变形。鼓膜凸附近出现应力集中，最大应力约8.33e-004 MPa。 结论 听骨链运动机理研究对人耳生命科学研究和临床手术均有一定的理论指导意义。
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