分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 、摘要 目的：分析和确认转录因子DLX1在骨形态发生蛋白9（Bone Morphogenetic Protein 9, BMP9）诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法： 首先，BMP9腺病毒感染C3H10T1/2细胞，RT-PCR和Western Blot检测下DLX1表达变化；随后，利用重组腺病毒技术分别过表达DLX1和RNA干扰（RNA Intenference, RNAi）抑制DLX1的表达，并利用碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, ALP)染色、钙盐沉积实验（茜素红染色），免疫细胞化学检测骨钙素（Osteocalcin, OCN）表达和裸鼠皮下异位成骨实验分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化的影响。荧光素酶报告基因实验和Western Blot分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞Smad1/5/8信号途径的影响。结果：BMP9可以促进C3H10T1/2细胞中DLX1基因和蛋白表达水平；过表达DLX1在体外可进一步促进BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积以及OCN的表达，过表达DLX1亦可促进BMP9诱导的裸鼠皮下异位成骨；反之，RNAi抑制DLX1表达后，由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积、OCN表达和裸鼠皮下异位成骨均相应均受到抑制。过表达DLX1可进一步增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞中Smad/1/5/8的转录调控活性，RNAi降低DLX1表达则可抑制BMP9诱导Smad/1/5/8的转录调控活性。但是，无论过表达DLX1和RNAi降低DLX1表达均不会对BMP9诱导的Smad/1/5/8磷酸化造成影响。结论：DLX1可以调节BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化，其调节作用可能是通过影响Smad1/5/8信号的转录调控活性而实现的。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的在黑色素瘤的小鼠模型上，探讨高强度聚焦超声(HIFU)处理对黑色素瘤细胞体内转移的影响。方法皮下注射小鼠黑色素瘤细胞B16-F10以构建小鼠黑色素瘤皮下移植瘤模型;待肿瘤最长径长至7-10 mm时进行HIFU处理，并设置实验对照组(荷瘤鼠辐照HIFU但保持治疗头功率源开关关闭，即假照组);治疗后每3d测量肿瘤长径和短径，共观察3周，绘制肿瘤曲线，统计生存率和转移率，并通过实时荧光定量PCR测定血液中黑色素瘤细胞3个标志物的相对表达量以监测血液中循环黑色素瘤细胞的数量，它们分别是黑色素瘤相关抗原A3 ( MAGE-A3 ) ,T细胞1识别的黑色素瘤抗原(MART 1)以及同源转化成对框基因转录因子PAX3);在HIFU治疗后14d，通过尾静脉注射再次移植B 16-F 10细胞，观测其肺转移率。结果(1)各自的中位生存时间及95%可信区间(CI):假照组分别为19.00 d和17.14-20.86 d,HIFU组则分别为26.00d和24.76-27.25 d，生存率差异显著(P<0.01);从治疗后第20天起，两组小鼠的肿瘤体积差异明显，从HIFU处理后第20天开始，包括处理后第23,26天，辐照组小鼠肿瘤体积明显小于假照组(P<0.05); (2)实时荧光定量PCR结果显示HIFU组小鼠在治疗后第7天的MAGE-A3 , MART 1和PAX3三个指标都明显低于假照组(P<0.05 )，在治疗后第14天其MAGE-A3的表达量仍然明显低于假照组(P<0.05 ) ; (3 )在HIFU治疗后14d通过尾静脉再次移植相同肿瘤细胞，HIFU组肺转移灶的数量明显低于假照组(P<0.05 )，肿瘤转移抑制率为42.4%。结论HIFU处理能够抑制黑色素瘤细胞在体内转移的发生，其机制可能涉及减少肿瘤细胞从原发灶的脱落和瘤细胞在肺部的定植能力。
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