松叶猪毛菜叶片原生质体的制备及优化

分类： 生物学 >> 植物学 提交时间： 2023-05-30 合作期刊: 《干旱区研究》

席昱欣 张玉慧 闻志彬

摘要： 从植物组织中释放出高质量的原生质体是建立其他技术体系如蛋白亚细胞定位、瞬时表达分析、蛋白质间互作的前提。为了快速挖掘C3-C4中间型植物松叶猪毛菜（Salsola laricifolia）的特殊功能基因，建立一个简单高效的叶片原生体的制备方法必不可少。本研究以松叶猪毛菜无菌组培苗的真叶为材料，分析不同纤维素酶和离析酶的浓度配比、渗透压对原生质体分离的影响。结果表明：采用25 d龄的无菌组培苗真叶，在2%纤维素酶+0.5%离析酶+0.6 molL-1甘露醇的酶解液中25 ℃酶解2 h，使用W5溶液在800 rpmmin-1的转速下纯化，原生质体产量可达1.21106 个，活力为85%。并且利用得到的松叶猪毛菜原生质体作为受体，用PEG 转化法成功转化pBI121-SaNADP-ME4-GFP 质粒载体，检测到SaNADP-ME4定位于叶绿体中。本项研究建立了松叶猪毛菜叶片原生质体高效制备体系，为松叶猪毛菜特殊基因功能的挖掘奠定了基础。

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