紫玉兰‘红元宝’花芽分化阶段基因定量分析的内参基因筛选

分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2021-12-19 合作期刊: 《广西植物》

章颖佳 程少禹 王卓为 戴梦怡 董彬 张超 张寿洲 王亚玲 亚梅

摘要： 为筛选紫玉兰‘红元宝’（Magnolia liliflora ‘Hongyuanbao’）二次花芽分化阶段稳 定表达的内参基因，该文以‘红元宝’不同花芽分化时期的花芽、叶为材料，基于转录组 数据，筛选出8 个候选内参基因：泛素酶基因（UBC）、肌动蛋白（ACT）、微管蛋白β 链（β-TUB）、微管蛋白β-5 链（β-TUB5）、微管蛋白α-3 链（α-TUB3）、磷酸烯醇丙酮 酸羧化酶（PEPC）、酰基载体蛋白2（ACP2）、酰基载体蛋白3（ACP3）。运用Primer Premier 5 设计引物，简单克隆和熔解曲线验证引物特异性；利用qRT-PCR 技术检测各个 候选内参基因的表达情况，结合GeNorm、NormFinder、BestKeeper 软件和RefFinder 在 线工具综合评估其表达稳定性，并通过目的基因TFL1 的表达分析验证其可靠性。结果表 明：8 个候选内参基因条带位置正确，熔解曲线呈单一峰，说明引物特异性良好；综合4 个软件的分析结果发现，β-TUB、β-TUB5 和α-TUB3 是‘红元宝’不同花芽分化时期较为 稳定的内参基因，而UBC 和ACT 为稳定性最差的内参基因；以单个内参基因和β-TUB5、 α-TUB3、β-TUB 组合为参照对TFL1 基因进行相对表达量分析，结果显示，β-TUB5、α- TUB3、β-TUB 及其组合的相对表达量趋于一致，而ACT 和UBC 并未对目的基因的表达 量进行有效的标准化。因此，β-TUB、β-TUB5 和α-TUB3 可作为‘红元宝’二次花芽分化 研究中稳定表达的内参基因。该研究结果将为木兰属植物二次成花分子调控机制研究提供 依据。

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