基于NOD样受体3炎性小体通路对利拉鲁肽在氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞损伤的作用机制研究

摘要: 背景  动脉粥样硬化是世界范围内引起心脑血管疾病最主要的原因，炎症是目前研究热点，其中 NOD样受体3（NLRP3）是研究最为深入的炎症小体。GLP-1受体激动剂有抗动脉硬化作用，具体机制尚不明确。目的  研究利拉鲁肽通过拮抗氧化低密度脂蛋白（oox-LDL）诱导的内皮细胞损伤的作用机制。方法  培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），取 HUVEC 加空白血清作为对照组，100 μg/mL 的 ox-LDL 干预 HUVEC 48 h 作为模型组，100 μg/mL的ox-LDL干预 HUVEC24h后分别加入 100 nmol/L、200 nmol/L、400 nmol/L 利拉鲁肽处理24h作为利拉鲁肽低浓度组、利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组。CCK-8 法计算细胞增殖率。通过扫描电镜观察焦亡细胞形态。检测乳酸脱氢酶（LDH）活力。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白介素（IL）1β、IL-18 表达水平。蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测NOD样受体3（NLRP3）、接头蛋白凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、天冬氨酸蛋白水解酶 1（Caspase-1）、焦亡执行蛋白（GSDMD）、N 端结构域的焦亡执行蛋白（N-GSDMD）表达水平。结果  模型组、利拉鲁肽低浓度组和利拉鲁肽中浓度组细胞增殖率低于对照组，利拉鲁肽低浓度组、利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组细胞增殖率高于模型组（P<0.05）。细胞扫描电镜结果示模型组细胞焦亡明显，利拉鲁肽低浓度组、利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组细胞焦亡情况明显改善。模型组、利拉鲁肽低浓度组 LDH 活力高于对照组，利拉鲁肽低浓度组、利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组低于模型组（P<0.05）。模型组、利拉鲁肽低浓度组 IL-1β 表达水平高于对照组，利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组 IL-1β 表达水平低于模型组（P<0.05）；模型组 IL-18 表达水平高于对照组，利拉鲁肽低浓度组、利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组 IL-18 表达水平低于模型组（P<0.05）。模型组 NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD 表达水平高于正常组，利拉鲁肽低浓度组 ASC、Caspase-1 表达水平高于正常组，利拉鲁肽中浓度组 NLRP3、ASC 表达水平低于模型组，利拉鲁肽高浓度组 NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平低于模型组（P<0.05）。结论  利拉鲁肽显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞NLRP3炎性小体活化，并且能够抑制内皮细胞的焦亡，具有抗动脉粥样硬化作用。