CDC42沉默对结直肠癌细胞形态的影响

摘要: 目的 根据CDC42蛋白二级结构，设计CDC42 siRNA干扰片段，构建CDC42稳定干扰shRNA载体。观察CDC42有效沉默对结直肠癌SW480细胞形态的影响。方法 根据CDC42基因CDS区序列，设计4条 siRNA片段。Western blot筛选最有效沉默片段，酶切插入真核表达载体，将构建的shRNA质粒载体，瞬时转染结直肠癌SW480细胞，QPCR及Western blot验证CDC42沉默效率；观察转染前后，SW480细胞形态变化。结果 4条siRNA转染细胞后，验证结果显示siRNA-3沉默效率大于50%，沉默效果最好，将此片段插入真核表达载体，测序结果提示CDC42 shRNA构建成功，转染SW480细胞后，CDC42基因mRNA及蛋白水平表达明显下降，差异有统计学意义；显微镜观察CDC42沉默后，SW480细胞周边伪足伸出减少，细胞变光滑，细胞整体体积明显减小。结论 成功根据基因序列设计有效沉默片段，构建CDC42稳定沉默载体，证实CDC42沉默可以逆向改变结直肠癌细胞高侵袭性形态，为研究CDC42对结直肠癌的发生、发展提供分子工具。